生物学常用试剂配制

生物学常用试剂配制 Document number【980KGB-6898YT-769T8CB-246UT-18GG08】

常用试剂

储存注意事项：储存于阴凉、通风的地方；远离火种、热源。避免光照。室温不超过30℃，相对湿度不超过80％。包装必须密封，切勿受潮。应与易（可）燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放，切忌混储，储区应备有合适的材料收容泄漏物。

操作注意事项：尽量在通风橱操作，加强通风，避免粉尘扩散。远离易燃、可燃物，避免与还原剂、碱类、醇类接触，防止包装及容器损坏。

EDTA（PH ）

组分浓度: mol/L EDTA（MW：）

配制量: 500ml

配制方法:

1．称取93g Na2EDTA·2H2O置于500ml蓝盖瓶中。

2．加入400ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。

3．用NaOH调节调节pH值至（约需加入20g固体NaOH），当pH 接近时，EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。

4．高温高压灭菌后，室温保存半年。

5M NaCl

组份浓度： 5mol/L NaCl (MW：

配制量： 1L

配制方法：

1.准确称取氯化钠，置于1L的蓝盖瓶中。

2.用去离子水溶解并稀释至1L。

3.高温高压灭菌后，常温保存。

CaCl2

组份浓度：L CaCl2 (MW：

配制量： 50ml

配制方法:

1.准确称取氯化钙 g于50ml的conical tube中。

2.用去离子水溶解并稀释至500ml，用μm滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌到进口的conical tube。

3.贮存于4℃。

50% 甘油

组分浓度： 50%(V/V) glycerol

配制量： 100ml

配制方法:

1. 量取下列试剂，置于250ml蓝盖瓶中： 100% glycerol 50ml

2.加入50ml去离子水，充分搅拌溶解。

3.高温高压灭菌，4℃保存。

4.使用时，到超净台分装。

Amp-氨苄青霉素（钠盐）

放置：置于4°C冰箱

配方及配法：配成200mg/ml的1000*溶液储存(40g溶于200ml蒸馏水中)，溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20°C冰箱第二层，以1*的终浓度（200ug/ml）加入培养基。

Kan-卡那霉素（硫酸根）

放置：置于试剂柜

配方及配法：配成20mg/ml的1000*溶液储存(4g溶于200ml蒸馏水中)，

溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20°C冰箱第二层，以1*的终浓度（20ug/ml）加入培养基。

DTT（二硫苏糖醇）

放置：置于-20°C冰箱顶层

配方及配法： 1M DTT的配制：溶解 IPTG 于50 mL水中，溶解后分装成1。5ml管，置于-20°C冰箱第二层使用浓度为1-10Mm

PMSF（苯甲基磺酰氟）

放置：试剂柜

PMSF的配制：分子量

保存室温保存，配成PMSF溶液后需-20℃保存。

配制溶解的PMSF于足量的异丙醇中，定容到50ml。分成小份贮存于―20℃。工作浓度 1mM

注意：有毒，对呼吸道粘膜、眼睛和皮肤有很强的危害性，配制时请在通风橱进行，并穿实验服及戴一次性手套。

10×TE Buffer（pH ）

组份浓度: 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA

配制量: 1L

配置方法

1. 量取下列溶液，置于1L蓝盖瓶中。

Tris-HCl Buffer（） 100mL

EDTA（） 20mL

2. 向蓝盖瓶中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定容至1L，高温高压灭菌。

4. 室温保存半年。

注意：此为贮存液，使用时稀释100倍，用于PCR纯化和质粒提取后产物保存。

PIPES （PH ）

配制量：10 ml（MW:）

配制方法：

1. 称取，加入到15 ml塑料离心管内。

2. 加8 ml的水，搅拌溶解。

3. 用5M KOH 调PH至

4. 滤膜过滤，-20℃保存。

Tris-HCl（）

组份浓度: mol/L Tris-HCl

配制量: 1L

配制方法:

1.称取的Tris-base（MW：）置于1L蓝盖瓶中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至。

4. 将溶液定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存半年。

Tris-HCl（）

组分浓度: mol/L Tris-HCL

配制量: 1L

配制方法:

1.称取121g的Tris-base（MW：）于1L蓝盖瓶中，

2.加入900ml的去离子水，充分搅拌均匀，

3. 用浓盐酸调pH值至，每升约需40-50ml浓盐酸，用水调整终体积至1L。如需其他PH的Tris，根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸。

4.高温高压灭菌后，室温保存半年。

注意：测PH时需使用温度补偿电极，因为温度变化对Tris的PH有很大影响。浓盐酸的体积（ml） 14 21 38 46 56 66 76

pH

10％SDS

组份浓度: 10％（W/V）SDS

配制量： 500mL

配置方法

1.称量50g高纯度的SDS置于500mL蓝盖瓶中，加入约400mL的去离子水，68℃加热溶解。

2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至。

3.将溶液定容至500mL后，室温保存。

注意： SDS为固体粉末状，吸入会对肺造成损害，应在通风橱中称取SDS。溶解时，SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

30％APS （过硫酸铵）

组份浓度： 30％（W/V）APS

配制量： 1mL

配制方法：

1.准确称取 APS。

2.加入的去离子水溶解。

3.贮存于4℃。

注意：30％的过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。

10×SDS-PAGE Running Buffer

配制量： 1L

配制方法：

1．称量下列试剂,置于1L蓝盖瓶中。 Tris 20g; Glycine 144 g; 10% SDS 100 ml

2．加入约700 ml的去离子水搅拌溶解。

3．定容至1L，混匀，室温保存。

50X TAE Buffer （）

组分浓度：2M Tris-base，100mM EDTA, 1M冰乙酸

配制量： 1L

配制方法：

1、称取下列试剂，置于1L蓝盖瓶中： Tris-base ; EDTA 200ml

2．加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入的冰乙酸，混合均匀。

3、加去离子水将溶液定容至1L。

4、高温高压灭菌后，室温保存半年。

6X DNA Loading Buffer（Agarose）

组分浓度：％（W/V）溴酚蓝％（W/V）xylene cyanol FF, 60% glycerol, 60mM EDTA配制量： 50ml

配制方法：

1.称取下列试剂，置于50ml离心管中：溴酚兰

2.向离心管中30ml去离子水，加热充分溶解。

3.加入15ml甘油，最终用去离子水定容至50ml，混匀，室温保存。

4.使用时，分装1ml一管，加入 ,4℃保存。

5X loading buffer (蛋白)

1．称量下列试剂置于10ml 塑料离心管中。

1 M Tris?Cl (pH ml

10%SDS （电泳级） 5ml

溴酚蓝（BPB） 25 mg(可以少加一点)

甘油 ml

2-ME 250ul

2．加去离子水溶解后定容至5 ml。

3．小份（500 ul/份）分装后于-20保存。

5．加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右