Raji细胞基因组文库的构建与筛选

中南大学学报（医学版）ＪＣｅｎｔＳｏｕｔｈＵｎｉｖ（ＭｅｄＳｃｉ）

１８５

ＡＲＴＩＣＬＥＳ

论著

Ｒａｊｉ细胞基因组文库的构建与筛选

高建明１，李小玲２，李桂源２

（１．三峡大学医学院病理生理学教研室，湖北宜昌４４３００２；２．中南大学肿瘤研究所，长沙４１００７８）

【摘要］

Ｉｔ的：构建Ｒａｊｉ细胞基因组文库，用ＥＢＶＤＮＡ探针对文库进行筛选。方法：Ｒａｊｉ细胞基因

组ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ酶切消化后。低熔点琼脂糖回收９～２３ｋｂ的酶切ＤＮＡ片段，通过匹配黏性末端与磷酸化的Ｌａｍｂｄａ

ＤＡＳＨ

ＩＩ

ＢａｍＨＩ酶切载体臂连接，在体外经包装系统包装成活的重组噬菌体，测定原始文库

与扩增文库的滴度，用同位素标记的ＥＢＶＤＮＡ探针对Ｒａｊｉ细胞基因组文库进行筛选。结果：Ｒａｊｉ细胞原始文库与扩增文库的滴度分别为１．８×１０５和２．８×１０８ｐｆｕ／ｍＬ。文库经筛选获得４个阳性克隆，随机挑取１个阳性克隆稀释后铺平板作进一步杂交鉴定，发现所有噬菌斑均有杂交信号，证明该克隆确为阳性克隆。抽提该阳性克隆ＤＮＡ，进行ＢａｒｎＨＩ酶切鉴定，证实插入片段的长度为８．５ｋｂ。经测序、ＢＬＡＳＴ序列比对，结果显示插入片段一侧为ＥＢＶ

ＢａｍＨＩ

Ｗ片段，另一侧与人类１５号染色体ＲＰｌｌ－６６５Ａ２２克

隆高度同源。结论：Ｒａｊｉ细胞基因组文库的成功构建，为进一步克隆包含ＥＢＶ整合位点的细胞基因组序列、探讨ＥＢＶ整合参与肿瘤发生发展的分子机制奠定了基础。

［关键词］

Ｒａｊｉ细胞；

Ｑ７８１

基因组文库；［文献标识码］

构建；

Ａ

筛选

ｌ

［中图分类号］［文章编号］６７２—７３４７（２００８）０３—０１

８５—０７

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｇｅｎｏｍｉｃｌｉｂｒａｒｙｆｒｏｍ

ＧＡＯＪｉａｎ．ｍｉｎ９１，ＬＩＸｉａｏ．１ｉｎ９２，ＬＩＧｕｉ．ｙｕａｎ２

Ｒａｊｉ

ｃｅｌｌｓ

（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＴｈｒｅｅＧｏｒｇｅｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＹｉｃｈａｎｇＨｕｂｅｉ４４３００２；

２．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ

Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＸｉａｎｇｙａＳｃｈｏｏｌ

ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｎｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ

４１

００７８，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＤＮＡ

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ

Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅ

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ｏｆ

Ｒａｊｉ

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ｉｔｂｙＥＢＶ

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ｓｃｒｅｅｎ一

收稿日期（Ｄａｔｅ

ｏｆ

ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ）２００７－０８－３１

高建明（１９７１．），男，江苏盐城人，博￡，副教授，主要从事肿瘤病理生理学研究。

作者简介（Ｂｉｏｇｒａｐｈｙ）

通讯作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ）李桂源，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｇｙ＠ｘｙｓｍ．ｎｅｔ基金项目（Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｉｔｅｍｓ）

国家自然科学基金重点项目（３０３３０５６０）；国家自然科学基金项日（３０４７０９５５）ｂｙ

ｔｈｅｋｅｙ

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Ｓｃｉｅｎｃｅ

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Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ

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中南大学学报（医学版），２００８，３３（３）

ｉｎｇ．Ａｌｌｔｈｅｐｈａｇｅｐｌａｑｕｅｓｗｅｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅ．ＤＮＡｏｆｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈＢａｒｎＨＩ．Ｔｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆｔｈｅｉｎｓｅｒｔｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓ８．５ｋｂ．ＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｎｓｅｒｔｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｓｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆｔｈｅＢａｍＨＩ －Ｗｆｒａｇｍｅｎｔ６６５Ａ２２

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ｐｒｏｖｉｄｅ

ｂａｓｉｓｆｏｒｃｌｏｎｉｎｇｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＥＢＶｊｕｎｃｔｉｏｎ

ｓｉｔｅｓａｎｄｉｎｔｅｒ－

ｐｒｅｔｉｎｇｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＥＢＶｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：

Ｒａｊｉｃｅｌｌ；ｇｅｎｏｍｉｃ …… 此处隐藏：15862字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……