细胞冻存保护剂二甲基亚砜的细胞毒作用

卜

细胞冻存保护剂立甲基亚碱的细胞毒作用一

刘

耳

王全兵

吴

燕

江苏哲启东肝心研究厉衍

清的

/ 0!1& 2+ 一,

摘几甲从亚以

要,

培养液配成& 万个 3 46 呱,。

5

的

单细胞悬液接种于+4 5,

玻璃培养瓶每瓶,

! #

是口前最好的细施冻存保护荆 (时细胞生长抑翻率近&,

7℃恒温培养细胞悬液置 )、

拟也达一种对细胞专性很大的化学试剂本研究结果表明培荞液中。、 (浓

,

%!

#浓度为 )

&

8三实验分组本实验共分 2组详见附

纬

,

度时抑鹅举为

绒,即使是 +喻的浓度, !国 对,

表

。

’

细胞的生长也有不利的影响!

我们认为堵养械中残存的

,

附衰组!

实脸分组情况表6 5( )&瓜

% ,

是冻存细施复苏后出现细饱毒现象的主要原因 、

因

别含最9

&

‘

对照

此戎们提出冻存细施时操作过程要迅速 细饱胜化后务必

洗涤尽 .去除, ! #

是减少其对细胭毒性作用保证细

%

&

(9

6沁 #:。

+沁

曲线符号

一9

…9

胞尽快恢复生长增殖的关健步葬

:

。

△一△△…△

在组织培养和各种细胞的实验研究及临

四观察指标

、

一

床应用中实验细胞的保存显得十分重要目前液氮一&2;℃冻存是公认的保存细胞的,

,

。

每组分别取,

)

各组细胞培养 )天每天瓶细胞以血细胞计数板计算,,

8

出细胞总数以细胞并以、

)

(台盼蓝染色一

,

计数拒桑

最佳途径<”细胞保护剂

。

,

在细脚冻存液中都含有血清和真中血清有助于解冻后提高细

)

瓶的平均数值绘制出各组细胞。

生长曲线生长抑制率与剂蚤反应曲线等细

?>胞的收扶率和其功能活性的恢复=

而保护,

胞活力参数曲线

剂可保护细胞免受细胞内结冰的操作从而保持细胞的存活与免疫生理分泌等特性及、、、

结

只一

完好的超微结构仁二甲基亚矾

’’,‘

」

,

此中以渗透性保护剂’‘,

一不同实验组对ΑΒΧ 7 7 )细胞生长8的影响图& 6表明随着培养液中% ! #浓、

! #

,

为最优细胞保护剂二

』

。

但

! %,

也是一种对细胞毒性很大的化学,,。

度的减少各组活细胞数随之增加生长抑制,

,

试剂为此我们研究了不同

浓度细胞生长的影响现将结果报告如下

!

#

对

率下降至第近对照组达;

,

组剂里时细胞生长曲线已接

,

Δ

而第 5:

)

组

%!,

#

浓

度对细胞的生长有明显的抑制作用抑制率材料和方法二一细胞及试剂ΑΒΧ一 7 7 )细胞为人、

;: ) )+

(活细胞数显著低于对照;,、

,

组其中以第& 6、

,

5 6%

组最为突职 0Ε% ‘

。

图

肝癌细胞系由王金兵等阁建株,,

/ 0!卜& 2+ ,

还表明

,

培养基为西德产品新生牛血清为杭州市四季青生物工程材料研究所生产,

+小时内最为严重随着培养时在培养后的 6,

!

#

对细胞生长的抑树作用。

,

! #

,

为。

间的延长各实验组细胞活力有所恢复8二荆黄反应曲线图 )表明、

,

日本进口上海试剂采购供应站试剂厂分装、一

一

,

。! %

对,

二ΑΒΧ 7 7 )细胞的培养选择对数生8

培养细胞的毒性作用呈闭值指数型曲线川曲线肩段明显且宽,在培养液中

长期的ΑΒ

Χ 77 )一

细胞以含 6 (新生牛血,

! %浓度

5业业鱼鱼传终应”+年第Φ

弓期

总第 7 7期,

Δ

Γ

(时曲线则进入急剧下降的直线段。,

!

Η

能但

,

对细胞的毒性作用显著加大活细胞数急

!% ,

又有很强的细胞毒作用

。

本研

究结果显示三种细胞活力参数曲线都表明不同浓度的,

剧减少8

早明显负相关讨

。

琳

对细胞的生长增欢均有,,

论,

影响在& (浓度时细胞生长抑制率几乎

为! #是最好的细

&

(,

。 5(浓度时

( 虽然抑制率也达 ),一

细胞在液氮中冻存

随着培养液中

! #浓度的降低抑制率逐

胞冻存剂

、

‘‘,

Ι

,

可长期保持细胞的活力与功

渐下降但即使在

。 & (的极低浓度

’

Γ

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。

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… ΚΦ

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争

#

培养时间5料5

培养时问Χ 77 )一

1培养液中。 ! %浓度

不同组别ΑΒ

图

6

不同浓度

!

#

对ΑΒ

Χ一 77

)

图

)

不同浓度% !国%在不同培养时间

细胞的生

长曲线

细胞生长的抑制率。

对ΑΜ丫,

一

77 )

细魄的荆最反应曲线

! #

对细胞的生长也有一定的影响,、

提示

主要是在室温尤其是在细胞培养过程中才

! #有强烈的细胞毒作用培养液中残存

发挥作用

。

而在冻存过程中由于细胞新陈代,

的

! #

即可对细胞存活率生长增殖能力,、。、

谢趋于停止,

!,

%

不能发挥其细胞毒作用,

。

等产生影响这些足应引起从事组织培养工作的医学科研人员的高度重视在组织培养中有时会遇到细胞刚复苏时

故而我们提出为尽量减少8

! #对细胞活

性的影响即使有一套好的细胞冻存方法具仃体操作中还应注意以下两点首先是细胞的冷冻保存准备工作要充分操作过程要快,,,,

形态饱满折光性好活细胞比例达; (以

,

,

上 但培养,

5

天后即发现细胞形态变差活细。,

,

加入细胞冻存液后应尽快进入降温程序以

胞比例下降细胞活力恢复迟缓等现象我们认为这里除其它因素外细胞复苏过程中,,

尽早放入液氮中进行深低温冻存减少室温

中

!%

对细胞的毒性作用其次是冻存细,

,

由于不重视操作程序在培养液中残存的%…… 此处隐藏：2562字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……