棉花基因组DNA快速提取方法改良

选择2种简化的棉花基因组DNA提取方法并进行适当精简改良后与传统CTAB提取法进行实验对比的结果显示,改良SDS-CTAB法所提DNA得率较高,纯度好,但其操作步骤相对复杂。改良CTAB法操作更加简捷,但DNA得率相对较低,所得DNA溶液浑浊度较高。相对于传统的CTAB提取法,两种改良方法都能够更加快捷的得到足量且纯净的基因组DNA,完全能够满足转基因后代PCR筛选检测的要求。

甘肃农业科技

2 1年第 4期 02

Ga s r c. n e h . No 4 2 1 n u Ag .S ia d T c n . 0 2

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棉花基因组 D A快速提取方法改良 N李忠旺，厚毅清，石有太，陈玉梁(肃省农业科学院生物技术研究所，甘肃兰州 70 7 )甘 30 0摘要：选择 2种简化的棉花基因组D A提取方法并进行适当 N精简改良后与传统 C A提取法进行实验对比的 TB结果显示，改良 S S C A D— T B法所提 D A得率较高，纯度好，但其操作步骤相对复杂。改良C AB法操作更加简捷， N T 但 D A得率相对较低，所得 D A溶液浑浊度较高。相对于传统的 C A N N T B提取法，两种改良方法都能够更加快捷的得到足量且纯净的基因组 D A,完全能够满足转基因后代 P R筛选检测的要求。 N C

关键词：棉花；基因组；D A D N;S S法；C A T B法

中图分类号：Q 1. 83 4

文献标识码：A

文章编号：10— 4 32 1)4 0 1— 3 0 1 16 (0 20— 0 10

An I r v m e tM e h d o mp o e n t o fDNA p d Ex r c i n Fo to n mi Ra i ta to r Co t n Ge o cLIZ ng wa g,HOU -q n ho - n Yi i g,S u— a,CHEN HIYo t i Yu— ing la

(ntueo ieh o g, a s cd m f gi l r c ne azo as 3 0 0 C ia Istt f o cn l y G nuA a e yo r ut a Si c,LnhuG nu7 0 7, hn ) i B t o A c ul eAbsr c: I re x lr s,smpe,a d e p cal eibe c t ng n mi t a t nod rt e poeaf t i l n s e il rla l ot e o cDNA e t cin meh d, rdt n l o a y o xr t to t ta io a a o wo ismp e i l me h d r i r v d n c mp r d i e p r n .T e e u t h w d t a t e mp o e S t o s we e mp o e a d o a e n x e me t h r s l s o e h t h i r v d DS- AB meh d wa i s CT to sc a a trsi f

c e n s l t n a d DNA h g il, b tt e e wa r x e me t se s i h t o .Th mp o e TAB h r c e t o l a ou i n i c o ih yed u h r s mo e e p r n tp n t e meh d i e i rv d C meh d h s f w r se s n s s i t a g u e fs mp e x r cin o h p e b t h c c e p o e s t o a e e t p,a d wa u t o lr e n mb r o a ls e ta t fmu i l ac y l r c s,b t D o u NA il s ye d wa lwe n o u in wa o la .T e r s l e n t t d t a w mp o e t o o r a d s l t s n tce n h e u t d mo s a e h tt o i r v d meh d,c mp r g t r dto a AB meh d f o s r o a n o ta i n CT t o s o i i l t tl D oa NA s lt n i o tn,c n g tq ik y s f ce tp r e o c DN,wh c s s f ce t o CR s r e i g i r n g n c i ai n c t o o o a e u c l u i n u e g n mi i A i h wa u in r P c e nn n t s e i i f a d s e d n e e t n e c n a t t ci . d o .

Ke y wor ds:Cotn t;Ge o c;DNA;S t o;C o n mi DSmeh d TAB meh d to

转基因材料的P R定筛选以及 D A子标记 C鉴 N分技术，需要快速、高效提取高质量的基因组 D A。 N

改进方法，通过对S S圳、C A法[ D T B L,、S S D一

棉花叶片由于富含棉酚、多糖、单宁等物质，在细胞破碎时，棉酚等多酚类物质自动氧化，与蛋白质、核酸等发生不可逆反应，结果形成棕色胶状复合物，影响高质量D A的获取，提取过程相 N对较为复杂[]因此找到一种快速、操作简单、 1。 廉价且能够保证D A N质量的基因组D A N的提取方法是科研人员一直追求的目标。 目前市场上有很多通用的D A快速提取试剂 N盒，操作

简单且速度快，但是大部分都不适合棉花基因组 D A的提取，专业开发的棉花基因组 N D A提取试剂盒由于价格昂贵，不适用于大批量 N DN A的提取 _] 3。为此，我们以传统的D A提取方 N法为主，借鉴已报道的关于棉花基因组 D A提取 N收稿日期：2 1— 3 6 0 2 0—1

结合C A法[。 TB’] 等方法的筛选和改进，探索出了种适合大批量棉花基因组 D A取的简化方法， N提 现将实验结果报道如下。 1材料与方法11实验材料 .

指示棉花品种为棕棉 B 0,由甘肃省农业科 C5

学院作物研究所棉花课题组提供。1 .试剂药品 2C AB、E A、S、T i、 B - ra teh n l T DT DS rs Mec po ta o、

P P4 V 0购自Sg公司，P R反应试剂 5u a i ma C/ l q T D A聚合酶是 MB emets司产品， 2 m l N I F r na公 . mo 5 d T x天根生化科技公司产品，D A M re N P Mi为 N akr为广州东盛生物科技有限公司产品，引物由上海

Ivrgn物技术有限公司合成。其它化学试剂 nioe生 t

基金项目：国家转基因生物新品种培育重大专项“西北干旱区转基因抗旱彩色棉新种质创制研究”2 0 Z 00 5 0 3 ( 0 9 X 8 0— 1B)

作者简介：李忠旺(9 0 ) 1 8一，男，甘肃山丹人，研究实习员，主要从事植物基因工程研究工作。联系电话：( )3 13 3 8。 0 1 59 19 0E- i: l h n w g 3 1 3. o mal i o g a 3@ 6 e m z n.

通讯作者：陈玉梁(9 3 ) 1 7一，男，甘肃靖远人，助理研究员，主要从事农业生物技术研究。E m i:C e Y 9 5 6 . m— al hn L 2@13 o c