荧光偏振免疫分析

均相酶免疫测定

沈富兵

概述用于小分子激素和半抗原(如药物)的测定 原理 酶标记物与相应的抗原或抗体结合后， 标记酶的活性会发生改变，不用分离结合 和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性 的改变，而确定抗原或抗体的含量。

最具代表性的两种技术

酶放大免疫测定技术EMITenzyme-mutiplied immunoassay technique

克隆酶供体免疫分析 CEDIAcloned enzyme donor immunoassay

酶放大免疫测定技术EMITenzyme-mutiplied immunoassay technique

酶：6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD) 底物： 6-磷酸葡萄糖

6-磷酸葡萄糖

6-磷酸葡萄糖酸 G-6-PD

辅酶Ⅰ(NAD)

还原型辅酶Ⅰ(NADH)340nm处最大吸收峰

克隆酶供体免疫分析 CEDIA cloned enzyme donor immunoassay

荧光偏振免疫测定(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)

荧光免疫分析法荧光抗体技术:检测组织或细胞中抗原

时间分辨荧光免疫测定 荧光免疫测定分析技术：

检测体液中微量物质

荧光偏振免疫测定(FPIA)

定义：荧光偏振免疫测定 (fluorescence polarization

immunoassay,FPIA),为一种均相荧光免疫测定方法，其利用荧光物质在溶液中被单一平面的 偏振光照射后，可吸收光能而产生另一单一平面 的偏振发射荧光，该荧光强度与荧光 标记物质在 溶液中旋转的速度与分子大小呈反比，常采用抗

原-抗体竞争反应原理，适用于小分子半抗原(如药物浓度)的检测。

原理： 光的本质是电滋波，光是各个方向电滋波的混合 物，当光线通过偏振滤光片后，形成只有一个方

向的电滋波，称之为偏振光。荧光物质经单一平 面的偏振光(蓝色光，485nm)激发后，可吸收 光能跃入激发态，在其恢复至基态时，释放能量 并发射出单一平面的偏振荧光(绿色光，525nm ~550nm) 。

485nm

偏振光

产生强偏振荧光 485nm 偏振光 产生偏振荧光吗？

荧光偏振免疫分析的特征： AgF分子小，转动速度快，偏振荧光弱;

AgF-Ab分子大，转动速度慢，偏振荧光强; 若待检抗原多，则AgF-Ab少，AgF多，偏振 荧光弱; 待检抗原含量与偏振荧光强度成反比。

485nm

偏振光