E2F-1基因真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株MKN-45增殖的影响

背景与目的：E2F-1基因在多种肿瘤细胞中过表达,并表现出抑制或促进肿瘤细胞增殖的不同特性。本研究通过构建E2F-1基因真核表达载体,分析E2F-1过表达对胃腺癌细胞株MKN-45的影响。方法：巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增E2F-1基因片段,用pCMV-HA载体构建真核重组质粒,转染MKN-45细胞(转染COS-7细胞用以鉴定所构建的载体)。Western blot检测转染情况,并通

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《癌症》C ieeJunl f acr 2 0,2 (0:04 16 hns o ra o C ne, 0 7 6 1 ) 16— 0 8

E F 1因真核表达载体的构建 2一基及其对胃癌细胞株 MK .5增殖的影响 N4王长青 肖强 李雷 谢玉波 2谭宁 -宫志伟 -, ,,, , Co sr cin o k y t co x rs ig E - n n tu t fa Eu aroi Ve t rE p e sn 2F 1 Ge e o c

基础研究

a d I fe to oi rt n o sr n e l Ln KN. 5 n t E c n Pr le a i fGa ti Ca c rCeI ie M s f o c 4WANG a g Qig’ AO a g,L e’ Ch n— n,XI Qin’ IL i,XI— AN n’ E Yu Bo,T Nig,GONG h— e’ Z i W i

[ B T A T] B CK OUN& OB E TVE: E F 1 s o ee pe s d i A SR C A GR D J C I 2 - v rx rs e n ima y tm o s a d fn t n s a c g n rt mo u pr s o n n u r n u ci s a n on o e e o u rs p e s rge e. T i o hss u y wa t o sr c h e o td s o c n t t t e r c mb n n u a y t e t r e pr s i g 2一 u i a t e k r o i v c o x e sn E F 1 c

1广西医科大学第一附属医院 .胃肠腺体外科 .广西南宁 50 2 307

c DNA, a d e p o e t e e e to F 1 O e e p e sO n t e p o i r t n o n x l r h f c fE2一 v r x r s i n o h r le a i f f o

h ma a ti a cn ma c l ie M K 4 M E u n g sr c rio eII N.5. c n THODS:T e f gme to 2F 1 h r a n fE .

g n sa le y p l rs h i e cin( CR) A e k roi v co e ewa mpi d b o mea e c anra t f i y o P . u ay t e tr c

2广西医科大学第一附属医院 .麻醉科，广

西南宁 5 0 2 307

e pe sn 2一 ( C 2 1H w sc n t ce i C— A, a d x rs i E F 1 p MV E F一 A) a o sr td wt p MV H n g u ht n f ce ft COS一 c l t i n i wh te E F 1 wa s c e sul r se td no a 7 el o de ty s f e h r 2 . s u c s f l y s b ln d no t e e k roi v co . p u co e it h u ay t c e tr CMV E F . . 2 1 HA s ta se t d no wa r n f ce itM KN. 5 el . Th x r s i n f E F 1 n 4 c l s e e p e so o 2 . i MKN一 5 e l 4 c l wa t c e b s s de e t d y

J D p r et fG s o t t a . e a m n at i e i l t o r n sna d G a d S r ey, n ln ug r

W e t r blt se n o.

T e r le a in f h p o i r t o MKN. 5 c l wa o s we b o o y f o 4 el s s b e d y c ln

f main a s y a d MT to or t s a n S me h d. Celc ce wa n lz d b lw yo t o l y l s a ay e y f o c t me r y

TeFr f l tdHo il h it f ie s t, sA a i paGu n x dc l U ie st a g iMe ia n v ri y, Na nn n ig,Gu n x,5 0 2, a g i 3 0 7P R. ia n

(C ) F M .RE U _S: R c mbn n l mi C -2 1H a u c sfl S L e o ia tpa d p MV E F一 A w s s c e sul T s yc n tu t d n ta se td no o sr ce a d r n f ce it COS 7 n MKN. c l M KN一 5 eI . a d 45 el s. 4 c l co e r sgnf a t e r n ln s we e i ic nl f we i pCMV- 2 1 HA o p h n n i y E F gr u ta i pCMV- A H

go p ( l±18v . 02 67<,1 . h rl rt nrt f ru 47 . s 3 .￣

.,P 00 ) T epoi ai aeo N 4 el f e o MK -5c l s w ss n ia t w ri p a i i nl l e CMV E F一 A g o p ( 35 o a .6 .% o g f c yo n— 2 1H ru 7 .% n D y5 35 n

2 Deate tfAnshs l y . p r n o eteio, m o￣T eFrt f ltdHopt, h i f ie sil s Ai a aG a g iMe i a n )r, u n x d lU he s c Na n n n i g,G a g i 3 0 7, u n x,5 0 2P R. ia n

D y6 61 o y 7 h n i p MV H ru (0%,P 00 ) T e Go a ,5 .% nDa )ta n C - A go p 1 0 < .1 . h /G,ph s r p to fMKN- 5 c l s sgnf nl ih ri CMV— F一 a e p o or n o i 4 el wa i ica t hg e n p s i y E2 1

H ru h ni p MV H ru ( 14 v . 97,P 00 ) h h s A go pta C— A go p 7 .% s 5 .% n< .5;teS p a eprpot n wa inf a t o ri CMV— 2 1 HA ou h n i CMV HA o ro s sg ic nl lwe n p i i y E F - gr p ta n p -

go p ( .% v . 07,P 00 ) CON USON:O ee pe s no 2 - ru 1 7 8 s 3 .%< .5 . CL I v rx rs i fE F 1 o 通讯作者：肖强s p r s e h ole a i n o s r a c rM K 4 e l . u p e s s t e pr i r t fga t c c n e f o i N一 5 c l s

C￣ so dnet: I O Qa g o epn ec X A i o nT l8— 7— 3 4 7 e:6 7 5 5 0 7 1 F x: 6 7— 3 4 7 a 8— 71 5 5 0 7 E- i: io in 2 0 0 a o ma l xa q a g 0 5@y h o.

KEY、『 RDS: Ga ti e pa m; M KN- 5 c l E2 ^O sr n o ls c 4 el s; F 1; P oi rt n r le ai f o

T a se t n; r n fc i o

【摘

要】背景与目的

:2—基因在多种肿瘤细胞中过表达， E FI并表现出抑制或促

Pnm . n C

进肿瘤细胞增殖的不同特性。本研究通过构建 E F1 2 -基因真核表达载体，分析 E F1 2- 过表达对胃腺癌细胞株 MK -5的影响。 N4方法：聚合酶链反应(oy eaec a 巢式 plm rs h i n rat n P R)增 E F 1因片段。 p MV H eco, C扩 i 2.基用 C . A载体构建真核重组质粒，染转 MK一5细胞 ( N4转染 C S7细胞用以鉴定所构建的载体 ) O一。Wetr l检测转染情 sn bt e o况，通过克隆形成实验、 T并 M S法检测细胞增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期，观察 E F 1 2一过表达对 MK 4 N一5细胞的影响。结果：C—2 1H p MV E F一 A重组质粒成功转染 M N4 K .5细胞。转染 p MV E F . A的 MK 4 C— 2 1H N一5细胞形成的克隆数为 47 .±

基金项目：广西自然科学基金资助项目( o 0 4 0 5 N .60 8 )

Gr n:Nau a ce c o n a in at t r S in e F u d t l oo a g i h a g Au o o u fGu n x u n t n mo s Z

R g n ( o 0 4 0 5 ei N . 6 0 8 ) o

1, .明显少于转染空载体组的 3 .￣ .( 00 ) 8 02 67 .1。转染 p MV E F一 A的 MK - C—2 1H N4 5细胞增殖随时间而减慢，第 5 6、、 7天的细胞增殖率分别为 7 .%、35 35 6 .%和

收稿日期：0 70 .2 20 .4 1修回日期：0 70—5 2 0 .51

5 .%, 61明显低于转染空载体组 (< .1。与转染空载体组相比，达 E F 1基因 P 00 )表 2-的 MK .5细胞在 G/。 N4 oG期所占比例明显提高 ( 1% v. 97 P O0 )S期所 7. 4 s 5 .%,< ., 5