形态学实验技术

形态学实验技术华北煤炭学院实验中心 李琪佳

重点介绍：组织切片制作技术石蜡切片常规染色技术 石蜡切片特殊染色技术

免疫组织(细胞)化学技术免疫细胞化学的理论基础 免疫荧光细胞化学技术 免疫酶细胞化学技术 亲和免疫细胞化学技术

电子显微镜技术(electron microscope, EM)1. 透射电子显微镜 2. 扫描电子显微镜 3.电镜技术与生物医学超微结构 4. 细胞超微结构与超微结构病理

激光扫描共聚焦显微镜技术(Confocal Laser Scanning Microscope)集高、精、尖细胞分析及工程技术于一体的新技术。该仪器突破了普通 光学显微镜不能对细胞或组织内部进行定位检测 的限制，实现了对细胞内部光学断层扫描成像。 可检测细胞内核酸、细胞骨架、细胞内pH、Ca离 子浓度、膜电位、过氧化物、细胞间通讯、细胞 筛选及定量等。为活细胞功能研究开辟了新途径， 成为现代细胞生物学研究不可缺少的的工具。

流式细胞仪技术(Flow Microfluorimetry) 是一种单细胞定量分析和分选的新技术。 其范围包括了细胞表面或细胞内的各种抗 原、蛋白、酶以及基因表达产物；还有细 胞内的核酸定量或DNA倍体、细胞周期分析； 尤其是癌基因的检测、血细胞表型分析、 细胞分子和粘附分子的检查、细胞凋亡分 析、肿瘤相关抗原及单种细胞的纯化。

第一章 组织切片制作技术 第一节概述组织切片的制作技术属于组织病理学范 畴它是指采用包埋剂使组织内渗入某种支 持物质，使组织保持一定的硬度，然后利 用切片机切成薄片，经染色在显微镜下观 察。根据支持物的不同，有石蜡切片、明 胶切片、塑料切片、冷冻切片等类别。制 成的切片捞臵于载物网上，经烘干后可进 行染色或备用。

组织切片技术包括组织的取材、固定、 脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染 色等。 组织病理学标本大致可分为：手术标 本、内镜取材标本、穿刺标本、细胞 学标本

第二节 组织的处理取材 固定 脱水 透明 浸蜡与包埋

一、取材( tisssue processing) 1 材料新鲜：活检组织离体后立即固定，最 迟不能高于30分钟。 2 取材部位及切面：纵切或横切往往是显示 组织结构明晰的关键。掌握正确的取材部 位就必须熟悉机体的组织结构和解剖特点， 原则上应在病变与正常组织的交界处取材， 避开坏死出血区。

甚至卷曲变形，特别是神经肌肉组织，可 将其两端扎在木片或小木棍上进行固定。 3.勿使组织受挤压：取材刀剪应锋利，切 开时取材刀严禁来回挫动，以避免组织结 构变形、细胞破碎。 4.防止变形：固定后的组织或多或少会产 生收缩现象

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组织块力求小而薄：切块的大

小、厚度及 质地决定了固定的效果，一般情况下，取 材大小为2×1cm,厚度为2-4mm。 二、固定(fixation) 固定是将某些化学试剂(固定液)渗透 到需要保存或制作切片的脏器或组织、细 胞中，使其所含物质尽量保持在生活状态 时的形态结构和位臵。

固定的目的：(1)防止组织细胞的死后变化，防止自溶和腐败， 以保持组织细胞的固有形态。 (2)使细胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等各种抗原 成份转变成不溶性物质，以保持它原有的结构与 生活时相仿。 (3)使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不 同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易 于鉴别和观察。

(4)固定剂兼有硬化作用,使组织硬化以增 加组织硬度、便于制片。 (5)防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原 有形态结构。 (6)经过固定的组织能对染料产生不同的 亲和力而着色清晰，便于辨认。

固定方法 浸泡固定 注射、灌注固定 微波固定 蒸汽固定

常用的固定剂单纯性固定剂：甲醛(10%福尔马林， formalin);4%多聚甲醛 乙醇；乙酸。 混合固定剂：中性甲醛pH 7.0(甲醛、磷酸 缓冲液);A-F液 (甲醛、酒精)

三、脱水(dehydration)将组织内的水分用某些化学试剂臵换出来 的过程 脱水的目的 标本经固定和水洗后，组织内有大量水份， 不能与二甲苯混溶，因此必须脱水。