人核糖体蛋白S13的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的：克隆人核糖体蛋白S13(ribosomal protein S13, RPS13)cDNA全长, 构建原核表达质粒, 诱导表达、纯化RPS13蛋白并制备其多克隆抗体.方法：应用RT-PCR方法从胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增出RPS13的cDNA全长, 利用DNA重组技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-RPS13, 双酶切及测序鉴定.将重组载体转化入大肠杆菌BL21中, 筛选抗性克隆并经DNA测序证实.IPTG诱导融合蛋白

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IS 10 8 3 SN 0 7— 7 8细胞与分子免疫学杂志 ( hnJC lMo I m n12 0, 3 4 C i e lm u o)0 7 2 ( l

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论著

文章编号：10 83 (07 0 06 0 07— 78 2 0 )4— 33— 4

人核糖体蛋白 S3的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 1郭雪艳，时永全，翟惠虹，孙力，刘理礼，韩霜，雷婷，樊代明(第四军医大学肿瘤生物学国家重点实验室西京医院消化病研究所，陕西西安 70 3 ) 10 2

Pr ka y te e pr si n a urfc to o r o i x e so nd p i a i n i o fRPS1 nd pr p r in f p lco l 3 a e a to o oy l na n i d g i s a tbo y a a n tRPS1 3GUO ey n,S Xu— a HI n qa g- u n, ZH i7 g,SUN AI Hu一 n

a t o y a d o u t e r s a c o t e u c in f h n i d n f r f r r e e r h f h f n t o t e b h o RPSI r t i i u o . 3 p en n t m r o

[ y rs r o o lpoen 1 Kewod] i s ma rti b S 3;p k roi x rs o r ay t e p - c eso in;r c e omb n d p o e n;p u ic t n;p l- ie r t i r r ia i f o oy co a n io y ln l t d a b

[要】目的：克隆人核糖体蛋白 S 3 r oo a po i摘 1 (i sm r e b l tnS 3 R S3 c N 1, P 1 )D A全长，构建原核表达质粒，导表达、纯诱

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化 R S3蛋白并制备其多克隆抗体。方法：应用 R -C P1 TP R方法从胃癌多药耐药细胞 S C 9 1V R中扩增出 R S3的 G 70/ C P1

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cN全长， DA利用 D A重组技术构建重组原核表达载体 p T N E一 2a 8 (+)R S 3 .P 1,双酶切及测序鉴定。将重组载体转化入大肠杆菌 B21中， I筛选抗性克隆并经 D A测序证实。IT N P G诱导融合蛋白的表达，利用镍离子亲和层析柱提纯融合蛋白， 经 S SP G D .A E和 Wetr l鉴定。用纯化的融合蛋白 H s s n bo e t i - R S 3免疫 B L/小鼠， LS P1 A Bc E IA法测定抗体效价，饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体，Wet l检测抗体活性。结果：R - s r bo e n t TP R扩增片段与预计目的基因片段大小一致；双酶切鉴定表 C

l b t c J AM: oc nt c poayt x r s n s a t I T os ut rkr i ep si A r r oc e opa m i f RPS1, e p e s a d u i h r t i o h ls d o 3 x r s n p r y t e p o e n f r t e f p e a a i n f o y ln l a t o y M ETHODS: RP 3 r p r t o p lco a n i d . o b S1

g n wa a lid y e e s t n c it n olme a e e e s mpie b rv re r s r i p y rs f a po

c a e ci ( T P R)f m h i l e pe s d c lo h i ra t n R - C n o r te h hy x rse el f 0 g g sr ut r g c lSGC7 01 VCR.Af rs q e c d.t e a ti m ld u el c i 9/ t e u n e e h

g n a ln di otee pe s nv co E -8 (+)t e ew sco e t x rs i e tr T2 a n h o p oc nt c R SI x rs in p s d p T 2 a o sr t P 3e pe s l mi E -8 (+)RP 3 u o a - SI.Th x r s i n ls d wa r n f r d n o t e e e p e s o pa mi s t s o me i t h E.c“ a 0 B 2 n c e n d b mp l e.an h n t e E o/B1 1 L 1a d s r e e y a in i d

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明，重组表达载体 p T2 a E -8 (+)R S3构建成功，D A测序 -P 1 N结果显示所获基因序列与 G n ak中收录完全相同。IT eB n PG诱导 3h后， S SP G 经 D .A E检测显示在 1 0 900处出现一新

c nann h x rs inpa m i wa d c d b P o tiig t e e pe so ls d si u e y ITG n n ad te p t i wa u i d y Hi a c lmn BAL/ mie h r en o s p re b s g ou . f t B c c we e i r mmu ie y te i nz d b h mmu o e s RPSI . Th i r n g n Hi- 3 e te twa a u e y E S a d t e p y l n l n io y wa . s me s r d b Ll A n h olco a t d s a b

生条带，与预计的融合白大小一致；用抗 H s利 i标签的抗体进行 Wetr l, s n bo结果证实融合蛋白表达成功。其免疫血清 e t经 Wet l证实可特异性的识别蛋白 R S 3 s r bo e n t P 1。结论：成功

地获得了 R S3的编码基因序列， P1并获得了纯化的 R S3蛋 P1白质，为制备 R S 3的单克隆抗体、进一步研究 R S 3在肿 P1 P1瘤中的作用奠定了基础。

o ti d . S UI: h x rs i ls dp T2 a ba e .PB U￣ T ee pe s npa mi E -8 (+) n J o -RPSI s o s r c e . T e 9 Da e o 3 wa c n t t d u h 1 k r c mb n d p t i ie r e n o wa u c s f l x r s e n t e E o BL b P s s c e s u l e p e s d i h c/ 21 y I TG o y fr 3

[关键词】核糖体蛋白 S 3 1;原核表达；融合蛋白；纯化；多克隆抗体[中图分类号】 Q 8 76[文献标识码】 B

h u s,p r id y sa c lmn a d c ni d y SDS- or uie b Hitg ou n o f me b f rP AGE n W e t r bo . T e oy l n a t Hi- S1 a d s e n lt h p lco al n i s RP 3

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a t o ywa ban d b mm u iig t e mie wi SI ni d s o t ie y i b nzn h c t RP h 3 poen RP 3 c ud b p cf al e o nz d b h n i rti. SI o l e s e ic l rc g ie y te a t i y -b d a e n W e t r lt CoNCLUS oN: RP 3 a oybsdo se n bo . I SI h s b n e p e s d n p r id u c s f l a d oy l n l e e x r s e a d u ie s c e s u l n p lco a f y a t Hi- n i s RPSI t o y h s b e r p r d.Ou t d a - 3 an i d a e n p e a e b r u yc n s b s d f rte pe a t n o e u e o h r p r i f mo o l n l n i s RPSI a o n co a a t Hi 3

核糖体蛋白参与肿瘤的发生发展是目前的研究热点。有报道在不同的病理学条件下，核糖体蛋白 的基因存在差异性表达。亦有研究表明核糖体蛋白在参与蛋白合成的同时，还参与细胞恶性转化，如已经报道 R S P6在肝癌、结肠癌等多种肿瘤中高表达’。越来越多的直接和间接的证据证实了核糖

收稿日期： 0 6— 9—1 20 0 9;接受日期： 0 6—1 2 20 1— 1

基金项目：国家自然科学基金资助项目( 0 37 0 3 6 07 )第四 3 5 0 8, 0 79 1;军医大学“后备人才”基金(0 5年) 20 作者简介：郭雪艳( 92一),,陕西西安人，硕士生 18女T l 2 - 4 7 2 9;E- i:g o u y n 5 e:0 9 8 7 5 2 mal u x e a 4 2@ s h . o o u c m C re p n i g a t o,E- i:f n am@ f ors o dn uh r mal a d i mmu e u. n .d c

体蛋白除了参与复制，录 R A的加工，转 N还具有核糖体外功能， D A修复，自体翻译调控，常细如 N正胞的恶性转化及发育。有研究显示在一些肿瘤耐药细胞中某些核糖体蛋白如 R S3 L3 L、￥7 P 1、 2、 6 2、