06绿叶中色素的提取和分离》

必修一实验六

《绿叶中色素的提取和分离 》

一、实验目标要求：

1.进行绿叶中色素的提取和分离。 2.探究绿叶中含有几种色素。

二.实验原理绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂 中，可以用有机溶剂提取绿叶中的色素。 绿叶中的色素有四种，分别是胡萝卜素、 叶黄素、叶绿素a和叶绿素b,它们都能 溶解在层析液中。四种色素分子在层析 液中的溶解度不同，因而随层析液在滤 纸上扩散的速度不同。其中胡萝卜素溶 解度最高，扩散速度最快，叶黄素和叶 绿素a次之，叶绿素b溶解度最低，扩散 的最慢。据此原理使各色素分离开来。

三、实验相关知识： 1、绿叶中的色素种类及生理作用： 叶绿素a 呈蓝绿色绿 叶 中 的 色 素

叶绿素 约占总 叶绿素b 呈黄绿色 量的3/4 胡萝卜素 呈橙黄色类胡萝卜素 约占总 叶黄素 呈黄色 量的1/4

吸收红 光、蓝 紫光 吸收 蓝紫 光

2、如何提取绿叶中的色素？ 绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙 醇中，提取绿叶中的色素。(相似相溶)

SiO2:使绿叶充分研磨，释放叶绿体中的色素。

CaCO3:防止研磨时色素受到破坏。

3、如何分离绿叶中的色素？

绿叶中的色素在层析液中的溶解度不同。溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；溶 解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。以纸

层析法将绿叶中的色素分离。

四、具体实验步骤(1、提取色素) 将深绿色的菠菜叶剪碎放入研钵中。

放入少量的SiO2和CaCO3,再加入3滴管无水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。 将糊状研磨物倒入放有尼龙布的漏斗中，

用研钵锤挤压，将滤液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。

四、具体实验步骤(2、分离色素) 在距干燥滤纸条窄端1cm处画一条铅笔细线。

1cm

四、具体实验步骤(分离色素) 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画 出一条直的滤液细线。重复3-4次。

滤液细线1cm

四、具体实验步骤(分离色素) 将滤纸条浸入层析液中，注意滤液细线不能 浸入层析液中。

滤液细线

层析液

从上到下 五、实验结果(现象): 胡黄 a b胡萝卜素

叶黄素叶绿素a 叶绿素b 层析液

滤液细线

六、实验讨论： 1.滤纸条上有几条不同颜色的色带？其排 序怎样？宽窄如何？这一说明了什么？ 4条；从上到下胡黄ab;叶黄素带最宽、 胡萝卜素带最窄；带宽窄与含量相关。 2.滤纸上的滤液细线，为什么不能触及层 析液？ 滤液细线上的色素将溶解于层析液中，不 能在滤纸上扩散，4种色素不能分离。

方法的改进提取色素 获取高浓度色素提取液是该实验成功的一个关键环节。一般要求色素 提取液

呈墨绿色。为了得到墨绿色的色素 提取液，可尝试： 1)称取新鲜绿色叶片2g放入研钵中， 杵和研钵一起放入冰箱中-20℃冷冻4~5h, 然后取出进行充分研磨，在加入6ml色素提 取液，用4层纱布过滤，将滤液收集到试管 或小烧杯中备用。

2)称取2g质地柔软、深绿色的草本植物的 叶片，除去粗的叶脉和叶柄，分多次加入研钵， 当碎叶片被研磨成粘粘的叶泥以后，再继续加入 少许碎叶片接着研磨，直到把所有的碎叶片全部 研磨好，研磨时可向研钵中加入少量的二氧化硅 和碳酸钙，待研磨充分后，再加入少量的氯化钠 (氯化钠是强电解质，能破坏色素中的胶体物质， 有利于色素的释放)和6ml色素提取液，就出现 了深绿色的液体。采用4层纱布包着研磨物并挤 出滤液，得到墨绿色的色素提取液。 3)将鲜菜叶放在40~50℃的烘箱中烘干研 碎即得干叶粉。实验时将1.5g干叶粉放入大试管 中，加入无水乙醇10ml,用玻璃棒搅动。10min 即可过滤。

制备滤纸条根据实验所选的试管大小，将干燥处理的 滤纸顺纸纹方向剪成长方形纸条，在纸条的 一端1.5cm处折一条细线，并剪去内角(剪角 时最好使其与端线成70~80℃夹角),另一 端直接用回形针夹住滤纸条。

划滤液细线1)用盖玻片代替毛细吸管划滤液细 线——“印泥法”。把滤液滴入培养皿 盖中，偏转培养皿盖，让滤液缓慢流动， 并使其面较宽。滤液流过之后，就在培 养皿盖底板上沾附一薄层滤液，用盖玻 片一侧边缘蘸取滤液，沿滤纸条上细线 轻按一下，待干燥后再重复几次。印出 的色素液线(最佳宽度为1~2mm)又细 又齐又匀，分离效果好。 2)点样法。用细毛笔、蘸水笔或注 射器吸取少量色素提取液点到滤纸条上 或圆形滤纸中央。

分离色素1)将3ml层析液倒入试管中，将滤纸条(有滤液 细线的一端朝下)轻轻插入层析液中，随后用棉 塞塞紧试管口。注意不能让滤液细线触及层析液。 2)取平面培养皿1只，将一圆形定性滤纸盖在培 养皿中，在圆形滤纸中央滴上2~3滴色素提取液， 静置1min,然后依次滴3~5滴层析液，每滴中间 间隔30s左右，然后盖上培养皿盖。几分钟后，圆 形滤纸片上呈现出4个同心的圆环，由内而外分别 是黄绿色、蓝绿色、黄色和橙黄色。实验效果明 显。此实验方法关键 有两点需注意：一是几次滴液体要在同一点 上，否则不能形成圆环；二是要掌握好滴层析液 的量和时间，否则会影响效果，甚至失败。