黄芪提取物对小鼠生长性能 - 抗氧化及免疫功能的影响- 副本

黄芪提取物可提高小鼠机体免疫功能和抗氧化机能

黄芪提取物的有效成分黄芪多糖和黄芪甲苷已广泛应用于保健品领域，用于预防和治疗糖尿病。在此之外，以水溶性杂多糖黄芪多糖为主的黄芪提取物在提高免疫和抗氧化功能的研究应用也被西安源森生物实验室提上日程。

本次实验中，西安源森生物选取60只健康小鼠，随机分为三组，对其中两组灌胃黄芪提取物，在连续14d之后进行对照，旨在测定分析黄芪提取物对小鼠生长性能、抗氧化及免疫功能的影响。

一、 材料与方法

（一）黄芪提取物的制备

根据[《黄芪多糖提取方法的研究》.广东兽医科技.2004.5.陈芳艳等]水煎法提取黄芪多糖，最佳提取时间为60min，提取温度100℃，溶比1：6，提取2次，经测定含有黄芪多糖13.46%。

（二）试验动物与处理

1. 试验小白鼠为60只6~8周龄昆明系小鼠（体重20±2g），购自河南省实验动物中心，随机无体重差异分3组，每组20只，即生理盐水对照组、高剂量组、低剂量组。 2. 每组小鼠均灌胃500μL/只，高剂量组按体重1g/kg量，低剂量组按100mg/kg量灌胃，对照组按500μL/只灌胃生理盐水，1次/d，连续14d，于第15d后颈椎脱臼处死小鼠。 称重后置于75%酒精的烧杯中消毒解剖，完好无损的取出脾、胸腺和肝脏，并准确称量。 （三）小鼠体重称量

实验开始和结束时称量体重。 （四）抗氧化功能的测定

1. 超氧化物歧化酶（SOD）活力单位定义：每毫升反应液中SOD抑制率达到50%时所对应的SOD量即为一个SOD活力单位。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力单位定义：0.1mL提取液在37℃反映5min，扣除非酶促反映作用，使反映体系中GSH-Px浓度降低1μmol/L为一个酶活力单位。

2. 取小鼠肝脏→准确称取组织→按体重体积1：9的比例加预冷的生理盐水制成10%的匀浆→3 000r/min离心15min→取上清→严格按照试剂盒说明方法测定过氧化氢酶（CAT），超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力及丙二醛（MDA）含量。 （五）脾脏、胸腺指数的测定

称量小鼠体重→解剖取胸腺及脾脏→用电子天平精密称取湿重→计算胸腺指数及脾指数。

小鼠胸腺或脾指数=胸腺或脾脏重量（mg）/体重（g） （六）小鼠淋巴细胞增殖活性的测定

1. 小鼠无菌取脾→置于适量（5~10mL）无菌PBS缓冲液的小平皿内→剔除其脂肪组织和结缔组织→剪碎脾组织→经200目筛过滤→用PBS缓冲液洗涤3次→每次离心10min(1 500r/min) →将细胞悬浮于2mL的完全RPMI-1640培养液中→用台盼蓝染色计数活细胞在95%以上→计数并高速细胞浓度为2X106cfu/mL，制成脾细胞悬液。

2. 将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，试验组加待测药物/含药血清100μL，对照组加培养液/生理盐水对照组血清100μL，每组重复5孔。

置温浴箱中37℃培养72h，培养结束前4h，每孔轻轻吸取上清液0.7mL→加入等体积不含小牛血清的RPM-1640培养液→加入MTT（5mg/mL）50μL/孔→每孔加100μL二甲基亚矾（DMSO）→震荡15min→用酶标仪在490nm处测定吸光度值（OD）。 （七） 统计学处理

应用分析软件SPSS 13 for Windows 对数据进行统计分析。

不同处理的样品数据显著性差异用单因子方差分析（AVOVA，Tukey 检验）进行检验，经检验水准取α=0.05作为差异显著的标志。所有数据以平均值(S)±标准差(SD)表示。

二、结果

（一） 黄芪提取物对小鼠生长性能的影响 实验前，选用同一批体重无显著差异的小鼠，其初始体重和实验结束时体重进行统计（结果见表1）：

表1结果显示，

A. 高剂量组和低剂量组的小鼠体重均较对照组显著增加； B. 高剂量组和低剂量住之间没有显著差异。 这表明黄芪提取物对小鼠生长有促进作用，而且这种作用与黄芪提取物灌胃剂量之间没有关联。

（二） 黄芪提取物对小鼠抗氧化性能的影响

从表2可以看出，

A. 黄芪提取物能显著提高小鼠肝脏组织中SOD、CAT、GSH-Px的含量; B. 黄芪提取物灌胃能显著降低肝脏中MDA水平；

C. 小鼠肝脏组织中SOD、CAT、GSH-Px、MDA的显著变化与黄芪提取物的灌胃剂量存在显著联系。

（三） 黄芪提取物对小鼠免疫器官的影响

从表3数据可以看出，每日对小鼠灌胃黄芪提取物:

A. 小鼠脾脏和胸腺指数均高于生理盐水对照组； B. 低剂量组脾脏指数差异不显著（P＞0.05）； C. 高剂量组胸腺指数差异显著（P＜0.05），脾脏指数差异极显著（P＜0.01）。 结果表明黄芪提取物具有提高小鼠机体免疫机能的功效。 （四） 黄芪提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

MTT比色法可宜测定哺乳动物细胞线粒体酶诱发，以此反映不少细胞的数量及生命活性。

由表4可以看出，研究结果表明，淋巴细胞经黄芪提取物诱导激活后，细胞活性明显增强，能量代谢水平增强，添加黄芪提取物组明显高于空白对照组，并且随着浓度的增加OD值增大，表明淋巴细胞增殖能力逐渐增强，高、低剂量组升高与对照组相比均有显著差异，表明黄芪多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖能力与剂量成依赖关系。

三、西安源森本次实验结果讨论

SOD、CAT和GSH-Px是动物体内重要的抗氧化酶，MDA是体内脂质发生过氧化作用后形成的一种过氧化物，这4个指标是反映集体抗氧化机能的重要指标。

1. 西安源森生物的实验，用黄芪提取物灌胃小鼠可以显著提高小鼠肝脏内SOD、CAT和GSH-Px活性显著降低MDA浓度。这表示对小鼠灌胃黄芪提取物能够提高小鼠机体的抗氧化机能。

2. 胸腺和脾脏是机体主要的免疫器官，免疫器官指数可以反映免疫器官的发育和免疫细胞的功能状态，间接反映了机体的免疫水平。

每日对小鼠灌胃黄芪多糖提取物，小鼠脾脏和胸腺指数均高于生理盐水对照组，说明黄芪多糖提取物具有提高小鼠机体免疫机能的功效。 3. 淋巴细胞体外转化代表着细胞免疫功能，因此测定小鼠淋巴细胞体外增殖反映是研究小鼠细胞免疫功能的重要手段和指标。

西安源森生物本实验结果表明，黄芪多糖提取物对小鼠淋巴细胞增殖具有很强的促进作用。

西安源森生物本次实验证实以活性成分黄芪多糖为主的黄芪提取物能显著增加小鼠体重和免疫器官的总质量，明显提高机体免疫功能和抗氧化机能，且对小鼠淋巴细胞增殖具有很强的促进作用。这个结果对黄芪提取物在增强免疫和抗氧化保健品领域的应用提供了一定的理论依据。