中药郁金的指纹图谱的初步研究(3)

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相对峰面积的一致性。

2.6.2.3 重现性试验

取5批温莪术药材样品(06-2)挥发油供试品溶液同法测定，考察挥发油色谱峰相对保留时间的及相对峰面积一致性。

2.6.3共有模式

在计算机上用9批温莪术的色谱指纹图谱的全谱数据，按共有模式生成法分别以平均矢量（均值）和中位矢量（中位数）的算式计算温莪术的共有模式。为进步评价所建的共有模式，分别用温莪术（06-1）和桂郁金检验共有模式。

平均矢量＝??x1j,x2j?,xij,?,xnj?n （1）

中位矢量＝median?x1j,x2j,?,xij,?,xnj? （2）

式中,xij为当保留时间为j时第i个样品的色谱数据。同时计算各样品a与共有模式b的相关系数（r）和夹角余弦（cosα）。

??a?a??b?b? (3)

?(a?a)?(b?b)??a?b?ab (4)

cos???ab?a?br?ii22iiii2i2i2.7 指纹特征的比较

分别取郁金与温莪术供试品溶液，在选定的色谱的条件进行平行的测定，获取相应的色谱指纹图谱，并对其指纹特征进行直观比较。

3 实验结果

3.1 挥发油的提取

由50 g温莪术得挥发油1.5 ml的， 挥发油呈深棕色，由此计算出温莪术的出油率为3 ％。郁金挥发油呈深紫色,挥发油总量为0.5 ml,郁金相应的出油率为1 ﹪。

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3.2 挥发油的测定波长

以乙腈和水的二元流动相，对标准莪术油进行全梯度洗脱得到的色谱光谱如见图1。由三维色谱光谱图1可知，标准莪术油分离出的大多数物质在210 nm有最大吸收，全部物质在330 nm以后无任何吸收，故选择210 nm为测定波长，500 nm为参比波长，根据高效液相色谱仪的特点，选择相应的谱带宽分别为4 nm、100 nm。

图1 全程梯度洗脱色谱光谱图 图2 全程梯度洗脱色谱图

3.3挥发油色谱分离

由标准莪术油的全程梯度洗脱色谱光谱图中截取210 nm检测波长的色谱图，结果见图2。由图2可知，在设定的全程梯度洗脱条件下，被分离的物质的色谱峰集中在保留时间35 min到77 min之间，相对应的流动相中乙腈的浓度为45%～87%；另由图2得知，在保留时间45 min到50 min之间，被分离的物质的分离不理想，故将流动相B改为0.1%磷酸水溶液，色谱梯度条件改为：0 min, 45%A-55%B；10 min, 5%A-45%B； 15 min，55%A-45%B； 47 min，87%A-13%B； 48 min， 100%A-0%B；保持至60 min。结果见图3。

图3流动相优化1色谱图 图4流动相优化2色谱图

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