中药郁金的指纹图谱的初步研究(2)

冷凝管中不在有乙醚滴下时，将挥发油取出。

2.1.3 姜黄素部分的提取

分别取温莪术与郁金原药材的粉末，称取1 g，加入100 ml甲醇，置于500 ml圆底烧瓶内,连接冷凝管，置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸30 min；停止加热，放置片刻，待没有回流液滴下时，过滤，取滤液在旋转蒸发仪上回收甲醇，浓集至1 ml，备用。

2.1.4 去油姜黄素部分的提取

分别取温莪术与郁金原药材的粉末，按上述挥发油的提取方法除去挥发油，将残渣置于干燥箱内，于100 ℃加热，直到烘干。再按上述2.1.3 的方法提取姜黄素，备用。

2.2 供试液制备

2.2.1 对照品溶液制备

分别精密称取吉马酮、莪术醇对照品各0.10 mg，用甲醇溶解并定容到100 ml，摇匀，备用。另取姜黄素适量，用甲醇配制成20 μg/ml的姜黄素对照品溶液。

2.2.2 样品液制备

取挥发油30 μl置于10 ml量瓶中，加入甲醇适量溶解后，加甲醇至刻度，摇匀，经微孔滤膜过滤后，备用。另分别取姜黄素部分与去油姜黄素部分的提取浓缩液，用微孔滤膜过滤，作为相应的姜黄素部分与去油姜黄素部分供试液。

表2 挥发油梯度洗脱条件

Time A﹪ B﹪ Flow

0 45 55 1.000 5 45 55 1.000 25 25 75 1.000 40 25 75 1.000 50 0 100 1.000 60 0 100 1.000

6

2.3 色谱条件

2.3.1 挥发油色谱条件

室温25℃，进样量 20μl。检测波长/波宽:220nm/4nm；参比波长/波宽:400nm/20nm。色谱峰光谱采集范围180nm～450nm。流动相为0.2﹪磷酸（A）-乙腈（B），流动相色谱梯度洗脱条件见表2。

2.3.2 姜黄素部分色谱条件

检测波长/谱带宽：420 nm/8 nm；参比波长/谱带宽:550 nm/50 nm； 色谱峰光谱采集范围为350 nm～550 nm；流速:1 ml/min；进样量:20 μl；柱温:常温；流动相： 0.2﹪磷酸（A）-乙腈（B）,梯度条件见表6。

表3 姜黄素的梯度洗脱条件

Time A﹪ B﹪ Flow

0 75 25 1.000 5 75 25 1.000 45 35 65 1.000

2.4 波长的选择

2.4.1 挥发油部分

以乙腈(A)和水(B)为流动相，对标准莪术油进行全梯度洗脱，进样量7 μl，流速，记录光谱色谱图。根据其三维色谱选取测定波长与参比波长。

2.4.2 姜黄素部分

用乙腈和4‰乙酸水溶液作为流动相，对姜黄的供试液进行全体梯度洗脱，记录色谱光谱图。根据姜黄中的物质与姜黄素对照品的光谱特点，确定测定波长与参比波长。

2.5 流动相的选择

2.5.1 挥发油部分

根据标准莪术油全梯度洗脱条件下的色谱图中色谱峰分离的效果与色谱色谱峰的峰

7

形，改变流动相的配比、流动相的酸度及梯度洗脱条件，不断优化色谱流动相及流动相洗脱梯度。在被分离物质色谱峰密集处，加大洗脱梯度，使色谱峰得到更好的分离，在色谱峰稀疏处，适当减小洗脱梯度。在色谱峰峰形不理想处，改变流动相中的酸度，进而变更流动相的梯度直至达到理想的色谱条件。

2.5.2 姜黄素部分

根据姜黄的非挥发油部分与莪术的姜黄素部分的初始全梯度洗脱的色谱指纹进行流动相洗脱梯度优化，不断改变流动相的配比、酸的种类与酸度，寻找较佳的流动相色谱条件。

2.6 温莪术挥发油指纹图谱的建立

2.6.1 共有指纹峰的标定

根据以牻牛儿酮对照品色谱峰与莪术醇对照品色谱峰的保留时间，并结合温莪术油的色谱图选定参照物。根据参照物的保留时间，计算指纹峰的相对保留时间。令参照物峰面积为1，按中药指纹图谱的要求，计算各共有指纹峰面积与参照物峰面积的比值，标定温莪术的共有指纹峰。

2.6.2 方法学考察

为了考察分析方法的可靠性，以温莪术药材样品(06-2)为例，以牻牛儿酮对照品色谱峰为参照峰对分析方法的稳定性、仪器精密度、实验方法重现性进行相应考察。

2.6.2.1 稳定性试验

取温莪术药材样品(06-2)挥发油供试品溶液分别在0 h、2 h、4 h、7 h、11 h、16 h、22 h、29 h，36 h和48 h不同时问点进行检测，用各主要色谱峰相对保留时间的RSD考察色谱峰相对保留时间的一致性。

2.6.2.2 精密度试验

取温莪术药材样品(06-2)挥发油供试品溶液，连续进样5次，以各色谱峰相对保留时间的相对标准差和色谱峰相对峰面积的相对标准差为指标，考察色谱峰相对保留时间及 …… 此处隐藏：96字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……