18种天然氨基酸分析(3)

Cys-CysLysAspProAla2-氨基丁酸GluSerArgGlyThrValMetIleLeurpTseihHPDNFB1020Time (min)30NH340CysTyr

图5 19种天然氨基酸-DNFB以及氨-DNFB的液相色谱图(2-氨基丁酸为内标物) 4.2.2 奶粉

2,4-二硝基苯酚图2为奶粉水解液经DNFB衍生、Diamonsil AAA氨基酸柱分离后的液相色谱图，由图可知除色氨酸(Trp)外，其余17种氨基酸全部检出，并达到较好分离。对所有检出氨基酸定量，可知蛋白质总含量为17.89%，与厂家标示的蛋白质含量(约18%)基本一致，并且与PITC衍生法测定的数值极为接近。平行样品的氨基酸含量以及蛋白质含量的RSD均小于2%，表明该方法具有较高的重现性。色氨酸无法检出是因为酸水解过程中，色氨酸被破坏，色氨酸分析时建议采用碱水解法。

Glu2-氨基丁酸AspNH3IleLeusheHiPDNFBSerProArgGlyThrValLysAlaCys-CysMet1020Time (min)3040CysTyr

图6 DNFB柱前衍生法分析奶粉中氨基酸的液相色谱图(2-氨基丁酸为内标物) 表4 某品牌奶粉中氨基酸含量(DNFB衍生法)

化合物 Asp

mol/100 g奶粉 0.0100 11

质量分数/% 1.33 RSD(n=6)/% 1.14 Glu Ser Arg Gly Thr Pro Ala Val Met Cys-Cys Ile Leu Trp His Phe Lys Tyr 总量

4.2.3 饲料

0.0266 0.0094 0.0036 0.0045 0.0062 0.0148 0.0061 0.0090 0.0025 0.0002 0.0067 0.0128 0 0.0028 0.0049 0.0111 0.0038 0.1350 3.92 0.99 0.63 0.34 0.74 1.70 0.54 1.06 0.38 0.04 0.88 1.68 0 0.44 0.81 1.63 0.70 17.89 .077 1.65 1.97 2.46 2.04 1.52 2.66 1.79 3.28 3.49 2.06 1.27 0 2.66 2.45 1.39 1.91 1.95 饲料水解液经DNFB衍生后Diamonsil AAA分离，由图7可知，除色氨酸外，其余17种氨基酸均被检出；对比表2和表5可以发现，在两种衍生法下，无论是单种氨基酸的含量还是氨基酸总量，数值非常接近，这也间接证明了两种方法的可靠性。

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AspGluGly2-氨基丁酸AlaCys-CysIleNH3LeuisHePhDNFBArgProSerValLysThrMet1020Time (min)3040CysTyr

图7 DNFB柱前衍生法分析饲料中氨基酸的液相色谱图(2-氨基丁酸为内标物) 表5 某品牌鱼饲料中氨基酸含量(DNFB衍生法)

化合物 Asp Glu Ser Arg Gly Thr Pro Ala Val Met Cys-Cys Ile Leu Trp His Phe Cys mol/100 g饲料 0.0315 0.0524 0.0207 0.0190 0.0376 0.0138 0.0224 0.0259 0.0184 0.0053 0.0009 0.0139 0.0252 0 0.0072 0.0120 0 13

质量分数/% 4.20 7.71 2.17 3.32 2.82 1.64 2.58 2.31 2.16 0.79 0.21 1.83 3.31 0 1.11 1.99 0 RSD(n=6)/% 2.13 1.42 1.97 1.22 1.57 3.42 2.65 2.47 2.32 3.54 2.96 1.46 1.22 0 2.37 2.18 0 Lys Tyr 2,4-二硝基苯酚0.0222 0.0077 0.4377 3.24 1.39 44.16 0.72 2.85 1.45 总量

4.2.4 氨基酸注射液

图7和表6是某品牌氨基酸注射液的分析结果。由数据可知，全部18种氨基酸以及衍生副产物均达到较好分离；从检出值来看，除胱氨酸和酪氨酸外，其他16种氨基酸的检出值与配方值偏差不超过±4.0%。胱氨酸和酪氨酸偏差较大与其浓度较低有关。

SerGly2-氨基丁酸Cys-CysNH3IleLeuTrpisHePhDNFBAspArgThrAlaValGluProMetLys1020Time (min)3040CysTyr

图7 DNFB柱前衍生法分析氨基酸注射液的液相色谱图(2-氨基丁酸为内标物) 表6 某品牌氨基酸注射液的检出浓度(DNFB衍生法)

化合物 Asp Glu Ser Gly His* Arg* Thr Ala Pro 配方浓度(g/L) 2.50 0.75 1.00 7.60 1.85* 4.53* 2.50 2.00 1.00 14

检出浓度(g/L) 2.50 0.78 1.00 7.43 1.83 4.60 2.52 1.95 1.00 Tyr Val Met Cys-Cys Ile Leu Phe Trp Lys* 0.25 3.6 2.25 0.10 3.52 4.90 5.33 0.90 4.30 0.31 3.54 2.26 0.08 3.41 4.94 5.33 0.87 4.16 *厂家生产注射液时，这3个化合物是以水合形式或HCl盐形式添加的，表中是经过换算得到的它们真实的配方浓度。

5 结论

迪马科技开发的氨基酸分析方法+Diamonsil AAA氨基酸分析柱应用于食品、饲料以及药品中氨基酸组成的分析具有分离效果好、分析结果可靠、重现性好等特点。

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