圆二色谱实验报告

圆二色谱应用技术

一、实验目的

1、了解圆二色（CD）光谱的工作原理。 2、学会运用圆二色谱测氨基酸，蛋白质，DNA。

二、实验原理

对R和L两种圆偏振光吸收程度不同的现象。这种吸收程度的不同与波长的关系称圆二色谱，是一种测定分子不对称结构的光谱法。圆二色光谱是一种差光谱，样品在左旋偏振光照射下的吸收光谱与其在右旋吸收光谱照射下的偏振光之差。物质的吸收光谱决定物质的颜色。如果一个物质对左旋偏振光和对右旋偏振光的吸收 不同,那么称该物质具有圆二色性(circulardi2chroism,简称CD)。同样,如果一个物质对于不同方向的线偏振光的吸收不同,那么该物质具有线二色性。很多各向异性的晶体具有线二色性;而很多生物大分子和有机分子具有圆二色性在分子生物学领域中主要用于测定蛋白质的立体结构，也可用来测定核酸和多糖的立体结构。

圆二色谱仪由光源、单色器、起偏器、圆偏振发生器、试样室和光电倍增管组成。

三、实验步骤

1.通高纯氮气45min后，开机

2.点亮氙灯:打开主机电源INSTRUMENTPOWER;打开氙灯电源XENONLMAPPOWER;等待LMAPready灯亮；按红色IGNITELMAP按钮

3.打开主板电源INSTRUMENTPOWER 4.打开Thermocubechiller(开关在冷却器左边）

5.打开软件，设置参数，选择数据保存设置；选择保存位置；开始实验，保存数据

6关软件TerminateCDSProgram中关闭 7关氙灯电源XENONLMAPPOWER 8关闭Thermocubechiller

9等待10min后关闭高纯氮气（可先行下述步骤）

10清洗比色皿、注射泵及其他附件 11光盘刻录数据

12关闭主机电源INSTRUMENTPOWER

四、试验结果和数据处

5020015-50DescriptionDescription10-1005b-150a0-200-5-250180200220240260280300-10180200220240260280300Wavelength(nm)Wanelength(nm)

图：a为稀释前曲线，b为稀释20倍后曲线

在蛋白质分子中，肽链的不同部分可分别形成α-螺旋、β-折叠、β-转角等特定的立体结构。这些立体结构都是不对称的。蛋白质的肽键在紫外185～240纳米处有光吸收，因此它在这一波长范围内有圆二色性。几种不同的蛋白质立体结构所表现的椭圆值波长的变化曲线──圆二色谱是不同的。α-螺旋的谱是双负峰形的，β-折叠是单负峰形的，无规卷曲在波长很短的地方出单峰。蛋白质的圆二色谱是它们所含各种立体结构组分的圆二色谱的代数加和曲线。因此用这一波长范围的圆二色谱可研究蛋白质中各种立体结构的含量。

在上面两幅图中，图b是图a稀释的到的，在上图中，可看出在270～240nm之间有明显的双负峰，可推断此物质为蛋白质，且为α-螺旋结构。