BD_FACSCalibur中文培训

目 录

第一章流式细胞仪简介 (1)

1.1 流式细胞术发展史 (1)

1.2 流式细胞仪构造和工作原理 (2)

1.2.1 概述 (2)

1.2.2 流式细胞仪构造 (2)

1.3 流式细胞仪的主要技术指标 (10)

第二章 FACSCalibur 的日常操作 (12)

2.1 FACSCalibur系统 (12)

2.2 FACSCalibur开机程序 (15)

2.3 FACSCalibur关机程序 (16)

2.4 FACSCalibur的维护与保养 (17)

2.4.1 FACSCalibur的每月维护 (17)

2.4.2 FACSCalibur的定期维护 (18)

2.5 常见故障排除 (20)

第三章 FACSComp软件 (22)

3.1 FACSComp简介 (22)

3.1.1 FACSComp运行条件 (22)

3.1.2 FACSComp的文件类型 (23)

3.2 FACSComp的功能 (24)

3.2.1 光电倍增管（PMT）电压的调节 (24)

3.2.2 荧光补偿的调节 (24)

3.2.3 灵敏度的测试 (24)

3.2.4 时间延迟的校准（对于双激光，配有FL4 PMT） (25)

3.2.5 HLA-B27的校准 (25)

3.2.6 LeucoCOUNT (25)

3.2.7 优化 (25)

3.3 FACSComp的运行 (25)

3.3.1 CaliBRITE Beads的准备 (25)

3.3.2 软件环境的设置 (26)

3.3.3 Beads的检测 (26)

3.3.4 Optimization (28)

3.4 Troubleshooting (28)

第四章 FACStation 数据管理系统 (30)

4.1 FACStation 数据管理系统组成 (30)

4.2 FACStation文件组成 (31)

4.2.1 如何建立文件夹 (31)

4.2.2 FACStation文件的类型 (31)

4.2.3 如何管理文件 (32)

4.3 实用的Macintosh OS X功能 (34)

4.3.1 菜单栏 (35)

4.3.2 Dock (37)

4.3.3 查找窗口 (37)

4.3.4 键盘快捷键 (38)

4.4 如何设置模版 (39)

4.5 实验练习：如何将ModFit LT的别名添加到Dock菜单下 (40)

4.6 可选性存储装置 (40)

4.6.1 可选性存储装置的基本工作原则 (40)

4.6.2 光驱的维护 (41)

4.6.3 光盘的维护 (41)

第五章 CellQuest Pro软件 (42)

5.1 概述 (42)

5.1.1 获取(Acquisition） (42)

5.1.2 分析(Analysis) (42)

5.1.3 从获取到分析(Acquisition Analysis) (42)

5.2 工具栏 (42)

5.3 CellQuest Pro 的文件 (43)

5.3.1 FCS数据文件 (43)

5.3.2 实验文件 (44)

5.3.3 仪器条件文件 (44)

5.3.4 统计文件 (44)

5.4 CellQuest Pro 的仪器控制 (44)

5.4.1 探测器 (45)

5.4.2 放大器 (45)

5.4.3 阈值 (46)

5.4.4 补偿 (46)

5.4.5 状态 (47)

5.5 CellQuest Pro 的视图 (48)

5.6 练习：3色或4色数据获取 (48)

5.6.1 质控－运行FACSComp (48)

5.6.2 优化 (50)

5.6.3 调出储存的由FACSComp 生成的仪器条件 (52)

5.6.4 调节FSC/SSC探测器（电压）及FSC阈值 (53)

5.6.5 设置淋巴细胞Region (53)

5.6.6 调节FL1、FL2、FL3的探测器（电压） (53)

5.6.7 调节荧光补偿 (55)

5.7 实验练习：3色/4色预获取 (55)

5.7.1 设置Acquisition & Storage 窗口 (56)

5.7.2 设置Parameter Description (57)

5.7.3 编辑Reagent Panel (58)

5.8 实验练习：数据获取 (59)

5.9 储存、恢复仪器设置 (60)

5.9.1 储存仪器设置 (60)

5.9.2 恢复仪器设置 (60)

5.10 储存实验模板文件 (60)

5.11 练习：数据分析 (60)

5.11.1 画Region (61)

5.11.2 限定象限marker (61)

5.11.3 分析四色 (63)

5.11.4 批分析其余数据 (63)

5.11.5 分析数据 (64)

5.11.6 将分析文件以模板形式保存 (64)

5.11.7 创建文具簿（stationery pad） (64)

5.11.8 将统计改为电子表格 (65)

5.12 Regions 和Gating（画门） (65)

5.12.1 设置Region (65)

5.12.2 改变Region (65)

5.12.3 用Region 统计来分析数据 (66)

5.12.4 门 (66)

5.12.5 多色门 (66)

5.12.6 组合门 (67)

5.12.7 在直方图上使用组合门分析 (68)

第六章 FACSCalibur 分选 (69)

6.1 分选概述 (69)

6.1.1 收集系统 (69)

6.1.2 分选模式 (70)

6.2 分选窗口 (71)

6.2.1 Sort Setup (71)

6.2.2 Sort Counters (72)

6.3 准备收集管 (72)

6.4 分选 (73)

6.4.1 清洗分选管线 (73)

6.4.2 准备 (73)

6.4.3 收集分选前数据 (74)

6.4.4 分选条件设置 (74)

6.4.5 分选目的细胞 (74)

6.4.6 清洗分选管路 (75)

6.4.7 浓缩样本 (76)

6.5 检验分选纯度 (76)

6.6 分选问题讨论 (77)

6.7 FACSCalibur无菌分选 (79)

6.8 分选细胞浓缩系统 (80)

6.8.1 系统简介 (80)

6.8.2 细胞培养基嵌入物和滤膜的制备 (81)

6.8.3 确定气压参数 (82)

6.8.4 如何用细胞浓缩系统进行分选 (82)

6.8.5 分选浓缩细胞 (84)

6.8.6 从分选管路中回收细胞 (84)

6.8.7 回收细胞做进一步分析 (85)

6.8.8 清洗分选管路 (85)

6.8.9 清洗浓缩器 (85)

第七章 DNA分析 (87)

7.1 概述 (87)

7.2 细胞周期 (87)

7.3 DNA检测的常用术语 (87)

7.3.1 Coefficient of Variation（CV）：变异系数 (87)

7.3.2 DNA index（DI）：DNA指数 (88)

7.3.3 Ploidy：倍体 (88)

7.4 影响流式DNA分析的因素 (88)

7.4.1 分辨率（CV） (88)

7.4.2 线性度 (88)

7.4.3 碎片 (88)

7.4.4 细胞双粘体 (89)

7.5 DNA质量控制（DNA QC Particles） (89)

7.5.1 样本制备 (89)

7.5.2 上机检测 (89)

7.5.3 常见错误排除 (90)

7.6 用CellQuest Pro软件获取DNA 数据 (91)

7.6.1 样本制备 (91)

7.6.2 用CellQuest Pro软件上机获取数据 (92)

7.6.3 质量控制 (95)

7.7 用ModFit 软件分析DNA数据 (95)

7.7.1 运用ModFit 进行自动分析 (96)

7.7.2 运用ModFit 进行手动分析 (96)

7.7.3 运用ModFIT进行同步化分析 (98)

7.7.4 运用ModFIT 进行增殖分析 (98)

第八章 HLA-B27分析 (99)

8.1 检测HLA-B27的意义 (99)

8.2 HLA-B27的检测方法 (99)

8.2.1 传统方法 (99)

8.2.2 流式细胞术 (100)

8.2.3 试剂盒介绍 (100)

8.2.4 实验原理 (100)

8.2.5 样本的收集和准备 (101)

8.2.6 流式检测 (102)

8.3 质量控制 (110)

附录1：组织相容性抗原和疾病的关系 (111)

附录2：强直性脊柱炎——一个常见但易被忽略的疾病 (112)

第九章 MultiSET软件 (113)

9.1 简介 (113)

9.2 MultiSET运行条件 (114)

9.3 MultiSET文件类型 (115)

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