HPLC法测定塞来昔布胶囊中有关物质

现代药物与临床 Drugs & Clinic 第28卷第2期 2013年3月

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HPLC法测定塞来昔布胶囊中有关物质

高洁1，曹光2，张晓东2，任晓文2*

1. 天津中医药大学研究生院，天津 300193

2. 天津药物研究院，天津 300193

摘 要：目的建立一种有效测定塞来昔布胶囊中有关物质的高效液相色谱法，并进行质量方法学研究。方法采用Phenyl-2 Hypersil柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇–0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）（45∶55）；柱温为40 ℃；检测波长为215 nm；体积流量为1.3 mL/min；进样量为80 μL。结果 4-[5-(2-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺的质量浓度在1.0～3.0 μg/mL具有良好的线性关系（r=0.999 6）；检测限（S/N=3）为0.4 ng。结论本方法简便准确、重现性好，精密度高，可有效地检测塞来昔布胶囊中有关物质，并为塞来昔布的检查和方法学研究提供了依据。

关键词：塞来昔布胶囊；4-[5-(2-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺；有关物质；高效液相色谱

中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1674 - 5515(2013)02 - 0182 - 03

DOI:10.7501/j.issn.1674-5515.2013.02.019

Determination of related substances in Celecoxib Capsule by HPLC

GAO Jie1, CAO Guang2, ZHANG Xiao-dong2, REN Xiao-wen2

1. Graduate School, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China

2. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China

Abstract: Objective To establish an HPLC method for the determination of related substances in Celecoxib Capsule and to study on quality by methodology. Methods The separation was performed on a Phenyl-2 Hypersil column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm); The mobile phase was methanol-0.02 mol/L monobasic potassium phosphate buffer (45∶55, adjusted to pH 3.0 with phosphoric acid) at a flow rate of 1.3 mL/min; The detection wavelength was 215 nm. The column temperature was 40 ℃, and the injection volume was 80 μL. Results The linear range of 4-[5-(2-methyl phenyl)-3-(triflorine methyl)-1H-pyrazole-1-based] benzene sulfonamide was 1.0—3.0 μg/mL (r = 0.999 6). The detection limit (S/N = 3) was 0.4 ng. Conclusion This method is simple, accurate, reproducible, and suitable for the determination of related substances in Celecoxib Capsule, which provides a reliable method for the sample examination and methodological study on celecoxib.

Key words: Celecoxib Capsule; 4-[5-(2-methyl phenyl)-3-(triflorine methyl)-1H-pyrazole-1-based] benzene sulfonamide; related substances; HPLC

塞来昔布化学名为4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺，由法玛西亚公司和辉瑞制药有限公司共同研发，1999年获得美国FDA 批准上市，2001年在中国上市。塞来昔布是环氧酶-2（COX-2）高选择性抑制剂，是第一个新一代COX-2抑制剂，能阻止炎性前列腺素类物质的产生，达到抗炎镇痛及退热作用[1]；能有效治疗类风湿性关节炎和骨关节炎，强效缓解关节炎的疼痛和炎症[2]；还可以预防多种恶性肿瘤，如前列腺癌、肠道癌及口腔恶性肿瘤等的发生[3-5]。有研究表明与传统非甾体抗炎药相比，治疗量的塞来昔布对COX-1几乎不抑制，使由于抑制COX而引起的胃肠道不良反应的发生率显著下降[6-8]。制剂中有关物质检查是控制成品质量的重要指标，然而关于塞来昔布的报道多见于临床研究。本研究采用HPLC法测定塞来昔布胶囊中有关物质，考察了可能存在的中间体杂质与主药的分离，并建立了专属性强，准确、可靠的有关物质检查方法，可有效控制塞来昔布胶囊质量。

收稿日期：2012-09-05

基金项目：国家重大新药创制专项（2011ZX09-401-009，2011ZX09201-101-19，2012ZX09105102）；天津市科技支撑项目（09ZCKFSH01200）作者简介：高洁（1986—），女，山东泰安人，在读硕士研究生，研究方向为药物新剂型及药物分析。Tel:136******** E-mail: gjdeyouxiang@504753a5bed5b9f3f80f1c07 *通信作者 任晓文（1966—），女，研究员，主要从事药物新剂型及药物分析研究。Tel: (022)23006953 E-mail: renxw@504753a5bed5b9f3f80f1c07

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1仪器与材料

LabAlliance高效液相色谱仪系统，包括Series 1500泵、Spactra 100紫外检测器、分析之星色谱工作站；KQ—2200型超声波清洗器（昆山市超声波仪器厂）；BP211D电子天平（德国赛多利斯公司）；AB204—E电子天平（梅特勒–托利多公司）；Elix 10纯水系统（美国Millipore公司）；GM—0.33隔膜真空泵（天津市津腾实验设备有限公司）。

塞来昔布胶囊（天津药物研究院提供，规格0.2 g/粒，批号20110801、20110802、20110803）；塞来昔布胶囊（辉瑞制药有限公司进口分包装，商品名西乐葆，规格0.2 g/粒，批号BK1100EE171、BK10CCEE256）；塞来昔布对照品（天津药物研究院提供，质量分数99.6%，批号DZ-002）；4-[5-(2-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺对照品（天津药物研究院提供，质量分数99.5%，批号LW-001）；甲醇（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；超纯水（实验室自制）；其余试剂均为分析纯。2方法与结果

2.1色谱条件及系统适应性试验

色谱柱为Phenyl-2 Hypersil柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇–0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）（45∶55）；柱温为40 ℃；检测波长为215 nm；体积流量为1.3 mL/min；进样量为80 μL。在此条件下塞来昔布峰与相邻杂质峰达到基线分离，理论塔板数以塞来昔布峰计应不低于3 000。

2.2杂质对照品溶液的制备

取杂质4-[5-(2-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺对照品约100 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加甲醇充分溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取5 mL置50 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得杂质对照品储备液。精密移取杂质对照品储备液0.5 mL，置100 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

2.3供试品溶液的制备

取塞来昔布胶囊20粒，倾出内容物，研细，精密称取适量（约相当于塞来昔布100 mg），置于50 mL量瓶中，加甲醇充分溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 mL置50 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

2.4阴性样品溶液的制备

按处方制备不含塞来昔布的空白辅料样品，按“2.3”项下方法操作，即得。2.5 专属性试验

取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按上述方法进行试验，记录色谱图，见图1，可以看出空白辅料对试验结果无影响。

1-杂质2-塞来昔布

1-imprity 2-celecoxib

图1空白辅料（A）、对照品（B）、样品（C）和杂质（D）以及杂质与塞来昔布混合样品（E）的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of blank adjuvant (A), reference substance (B), sample (C), imprity (D)

and mixed sample of imprity and celecoxib (E)

2.6检测限的测定

取 …… 此处隐藏：2437字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……