发酵工程的论文

醋酸菌的分离鉴定

摘要：本试验选用腐烂的葡萄皮为样品，采用纯化培养方法，从中筛选出醋酸菌，再对其进行形态特征、生理生化特征试验，最终鉴定其为醋酸杆菌。在醋酸菌培养基中添加适量的碳酸钙，醋酸菌产酸后则会形成明显的透明圈，向培养基滴加石蕊试剂也可以证明其菌体产酸，间接可证实其为醋酸菌。

关键词：醋酸菌；分离；鉴定

前言： 醋酸菌分布广泛，在果园的土壤中、葡萄或其他浆果或酸败食物表面，以及未灭菌的醋、果酒、啤酒、黄酒中都有生长。醋酸菌是细菌，属于醋酸单胞菌属，细胞从椭圆到杆状，单生、成对或成链。在老培养物中易呈多种畸形，如球形、丝状、棒状、弯曲等。醋酸菌属于兼性厌氧异养型微生物。培养醋酸菌时，需要用含糖或酵母膏（维生素B）的培养基，在肉汤蛋白胨培养基上生长不良。大多数菌株可用六碳糖和甘油作为碳源，对甘露醇和葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用，不分解乳糖、糊精和淀粉。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料

紫葡萄：来自市场购买。

1.1.2 试剂

葡萄糖，酵母膏，碳酸钙，无水乙醇，琼脂，石蕊指示剂。

1.1.4 培养基

醋酸菌固体培养基：葡萄糖1%，酵母膏1%，CaCO3 2%，无水乙醇6%vol，琼脂2%，自然pH值。

醋酸菌液体培养基：葡萄糖1%，酵母膏1%，无水乙醇6%vol，自然pH值。

1.2 方法

1.2.1 菌种分离方法

样品→富集培养→稀释涂布→挑取有变色圈的单菌落→培养特征→形态特征→生理生化特征→菌种鉴定

1.2.2前期准备工作：到市场购买放置时间较久的紫葡萄，将其放置几天使其自然腐烂。

1.2.3 增殖培养

取采集的样品分装放在两个盛有50mL的增殖培养基（葡萄糖1%、酵母膏1%、无水乙醇6%vol）的250mL三角瓶中，并编号为1和2，在30℃、150r/min振荡培养48h后，选择pH值明显下降，并有醋酸味的一瓶培养基供平板分离。

1.2.4 菌种分离纯化

稀释增殖培养，将不同浓度的稀释液（10-1~10-6）分别涂布于固体培养基平板上，30℃培养3d~5d。

1.2.5 醋酸菌鉴定试验

观察培养基特征，检验是否有透明圈产生；用石蕊试剂检测培养基，若有醋酸菌，则培养基显红色。若不变色则无醋酸菌。

2 结果与分析

2.1 菌株分离纯化

在6个不同浓度的培养皿中均有菌种较为单一的菌落生成，在稀释浓度较低的培养基，形成比较明显的醋酸菌单菌落，但是在6个培养皿中均无明显的透明圈。

2.2 醋酸菌鉴定试验

利用醋酸菌的产酸反应进行鉴定试验。醋酸菌是专性好氧细菌,其细胞膜上

含有高活性的乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶复合体，能将乙醇氧化为乙酸。用石蕊试剂检测所产菌落周围的培养基，培养基显红色，即有明显的显色反映，可知其为醋酸菌产酸所致。

2.3误差分析

2.3.1无明显透明圈形成原因

可能是在配制培养基过程中添加的碳酸钙比较少量，导致结果不明显。

2.3.2

可能是醋酸菌分离纯化后培养的时间不够长，导致醋酸菌产酸量太少，使产生的透明圈很不明显，使我们很难看到透明圈的存在。

2.3.3

可能是培养基灭菌时间或温度达不到要求，以至于有杂菌存在，抑制了醋酸菌产菌。

参考文献

1.韦革宏，杨祥主编.发酵工程[M].科学出版社，2008年。

2. 张彩.优良醋酸菌的分离筛选[J].天津商学院学报，1994，（4）：16~20

附:图片材料