实验四 微生物的显微镜直接计数法和大小的测定

实 验 五实验四 微生物的显 微镜直接计数法和 大小的测定

实验目的 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显

微镜下测定微生物大小的方法。 微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的

方法。 方法。

实验材料 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、

血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、 血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、 无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。 无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。

实验步骤 测定酵母菌细胞的大小

测定的工具： 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺

目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍 数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差， 因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。

目镜测微尺的校正：在40×镜下，看清镜台测 目镜测微尺的校正： ×镜下，

微尺的刻度后，转动目镜， 微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜 台测微尺的刻度平行，移动载物台， 台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测 微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合 点与镜台测微尺的某一刻度重合， 微尺的 点与镜台测微尺的某一刻度重合，然 仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。 后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计 算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的 格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10µm, 格数。由于镜台测微尺的刻度每格长 ， 所以可得 目尺每格长度(µm)=(台尺格数×10)/目尺格数 (台尺格数× ) 目尺格数 目尺每格长度 菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，取 菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，

下镜台测微尺，将盖片置于载物台上， 下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在 40×镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。 ×镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。

酵母菌显微直接计数 酵母菌显微直接计数

方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数 平板菌落计数法； 方法：活菌计数法 平板菌落计数法 血球计数板或霍瑟( 法——血球计数板或霍瑟(Peroff Hausser)细菌计 血球计数板或霍瑟 ) 数板(二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已)。 数板(二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已)。

1. 2.

3. 4.

5.

取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 取清洁无油的血球计数板， 盖血盖片。 盖血盖片。 取酵母菌液，摇匀， 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴 一小滴，使菌液自行渗入， 一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有 气泡。 气泡。 用10×镜观察并将计数室移

至视野中央。 ×镜观察并将计数室移至视野中央。 在10×镜下计数：计数 个(或5个)中格的 ×镜下计数：计数4个 个 平均值，然后求得每个中格的平均值。 平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上 16(或25)就得出计数区总菌数，最后再换 ( )就得出计数区总菌数， 算到每mL菌液中的含菌数。 菌液中的含菌数。 算到每 菌液中的含菌数 注意事项：计上不计下，计左不计右。 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽 计一半

实验结果 目镜测微尺标定结果： 40×镜下 倍目镜测微尺每格长度是菌号1 2 3 4 5 均值酵母的直径大小测定结果

μm。

目镜测微尺格数

实际直径/µm

将显微计数结果记录于下表中。T表示五个

中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。各中格中菌数 1第一 室 第二 室

T 5

D

2

3

4

二室 平均 值

个 /ml

问题与讨论 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来

校正？ 校正？ 在显微镜下直接测定微生物数量有什么

优缺点？ 优缺点？

本次实验课结束请确保血球计数板清洗干净！ 请值日生同学留下值日 下周再见！