凝血四项操作规程

尤其适应于深圳锦瑞机型

凝血四项操作规程

1.目的

规范凝血四项（PT、APTT、TT、FIB）的测定。

2.实验原理

凝固法原理：在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后，加入试剂后，采用波长为660nm的光照射样本。凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。从散射光光强度的测定，可以做出凝血曲线，通过Percentage Detection Method法求得血液凝固时间。

3.标本要求

3.1.标本准备：采用塑料采血管或硅化玻璃注射器静脉采血，针头必须为21号以上，儿童可用23号。采血技术熟练，采血时止血带不可束缚过紧，并且以1分钟完成为宜，最多不宜超过3分钟以免某些凝血因子及纤溶因子活化。

3.2.抗凝剂选择：以109mmol/L枸椽酸钠溶液为佳，血与抗凝剂按9：1混合。建议用已加有抗凝剂的硅化真空采血管。也可用带盖塑料管或硅化玻璃管，但应保证血与抗凝剂的比例正确。

3.3.收到血标本后应尽快离心分离血浆，并尽快测量，全血储存在4-8℃不应超过2小时，室温下富含血小板血浆可存放3小时，去血小板血浆可存放2小时；4小时内不能测定的血浆应冷藏；不要把血浆置于37℃条件下超过10分钟。应了解不同存放温度和时间对各种凝血因子活性检测的影响。

4.材料

4.1.试剂的选择一方面要根据所用检测仪器，例如：光电检测法的凝血仪不宜用透光度差的试剂；另一方面要根据实验试剂对疾病的敏感性，例如APTT试剂中所用活化剂不同（可用白陶土、硅藻土和鞣花酸），该试剂对肝素、凝血因子Ⅷ和因子Ⅸ缺乏及狼疮样抗凝物敏感性不同，所以需根据检测项目来选择不同活化剂。(例如常用的APTT试剂的活化剂，以白陶土对凝血因子敏感，硅土对因子及肝素均敏感，鞣花酸对狼疮样抗凝物敏感性较强.PT试剂的选择也一样,例如对口服抗凝药物(华法令)检测应选择ISI与1.0接近的PT试剂。)血栓与止血检验应尽可能选用仪器生产厂家推荐的配套试剂，并选择使用与仪器原理相匹配的试剂。

4.2.正常对照血浆：正常对照血浆有商品供应，多为冻干品，也可自制，要求采集20份以上男女各半，年龄在18-25岁之间的健康个体，删除服药者，须在平静状态下采血，血液经抗凝离心后分离血浆。取等量的各份个体血浆进行混匀，然后分装小瓶，冻存于-80℃或冷冻干燥备用。

4.3.参比血浆或称标准血浆（质控血浆）：为了使检测结果在同一实验室的不同时期或不实验室间具有可比性，就要使用标准品。

5.仪器与试剂

5.1仪器：深圳锦瑞CA-54半自动化血凝分析仪。

5.2试剂：上海太阳生物技术有限公司。

5.3仪器安装后应对其主要性能参数进行评价，内容包括精密度、线性范围、可比性、抗干扰试验试验等。评价结果应在仪器说明书标示范围之内。

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文件编号；SZKL-LJ-03 版本/修订号；1/0 生效日期：20150101 主题内容 凝血四项操作规程 页码；第 2 页 共 5 页 5.4 仪器在测定常规标本前应使用配套的校正物建立标准曲线，在更换新批号的试剂或仪器 维修后，要重新建立标准曲线。无校正物的测定项目，可伤使用配套的定值质控物进行测定， 测定结果应在定值质控物标示的允许范围内。 5.5 每台仪器上使用的凝血活酶试剂应有特定的 ISI(国际敏感指数)值，这样才能使患者 INR(国际标准化凝血酶原时间)比值的结果有可比性。 自动终点测定目前得到广泛应用，仪器有半自动和全自动两种类型。仪器应用的检测系 统有化学的、机械的或电子等，形成凝块所需时间也有差异。对每种方法都应建立自己正常 参考范围，一些光学系统进行测定的仪器对血脂高、溶血、黄疸血浆不易得出精确的检测结 果。 6.操作步骤 昆仑泌尿外科医院检验科 临检室作业指导书 6.1 PT 检测步骤 6.1.1 打开电源开关，仪器自检后进入主菜单页面，然后按“1”进入“测量标本”子菜单。 6.1.2 设置测试项目和病人编号：按”1“键设置测试项目，按“←”“→”选择“PT”,确 认请按“确认/ENTER”键，取消请按“菜单/MENU”键。按“2”键设置病人编号，直接输入 病人号后，确认请按“确认/ENTER”键，取消请按“菜单/MENU”键。 6.1.3 将 PT 应用试剂根据测试样本多少取适量于试剂预温位预热至 37C 6.1.4 加血浆 20ul 于空比色杯内(样本应加入杯子底部，不能有气泡),置于测试通道或预 温位预温 2 分钟。 6.1.5 当预温到时后，将已预温的比色杯放入测试通道内，按“通道 1”键，屏幕提示“请 加入试剂”时，用联机加样枪吸取 40ulPT 工作试剂加入比色杯中，当加样器按到底后松开时 仪器自动开始计时检测，最后显示和打印测量结果。 6.1.6 质控品、正常对照血浆：操作方法同样品。 6.1.7 关机：按“菜单/MENU”键，退回到主菜单后即可关机。 6.2 APTT 检测步骤 6.2.1 打开电源开关，仪器自检后进入主菜单页面，然后按“1”进入“测量标本”子菜单。 6.2.2 设置测试项目和病人编号：方法同 6.1.2 6.2.3 加血浆 20ul 于空比色杯内，再取 APTT 试剂 20ul 加入比色杯内，混匀后，置于测试通 道或预温位预温 3 分钟。 6.1.4 当预温到时后，将已预温的比色杯放入

测试通道内，按“通道 3”键，屏幕提示“请 加入试剂”时，用联机加样枪吸取 20ul CaCl2(CaCl2 预温 3 分钟)加入比色杯中，当加样 器按到底后松开时仪器自动开始计时检测，最后显示和打印测量结果。 6.1.5 质控品、正常对照血浆：操作方法同样品。 6.1.6 关机：按“菜单/MENU”键，退回到主菜单后即可关机。 6.3 TT 检测步骤 6.3.1 打开电源开关，仪器自检后进入主菜单页面，然后按“1”进入“测量标本”子菜单。

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6.3.2 设置测试项目和病人编号：方法同 6.1.2 6.3.3 加血浆 30ul 于空比色杯内，置于测试通道或预温位预温 2 分钟。 6.1.4 当预温到时后，将已预温的比色杯放入测试通道内，按“通道 4”键，屏幕提示“请 加入试剂”时，用联机加样枪吸取 30ul 已预温好的 TT 试剂加入比色杯中，当加样器按到底 后松开时仪器自动开始计时检测，最后显示和打印测量结果。 6.1.5 质控品：操作方法同样品。 6.1.6 关机：按“菜单/MENU”键，退回到主菜单后即可关机。 6.3 FIB 检测步骤 6.3.1 打开电源开关，仪器自检后进入主菜单页面，然后按“1”进入“测量标本”子菜单。 6.3.2 设置测试项目和病人编号：方法同 6.1.2 6.3.3 加血浆 40ul 于空比色杯内，置于测试通道或预温位预温 3 分钟。 6.1.4 当预温到时后，将已预温的比色杯放入测试通道内，按“通道 2”键，屏幕提示“请 加入试剂”时，用联机加样枪吸取 20ul 已预温好的 FIB 试剂加入比色杯中，当加样器按到 底后松开时仪器自动开始计时检测，最后显示和打印测量结果。 6.1.5 质控品：操作方法同样品。 6.1.6 关机：按“菜单/MENU”键，退回到主菜单后即可关机。 7.质量控制 7.1 质控品跟随常规标本一起测定，意即质控品必须与患者标本在同样条件下进行检测，建 立质控图信息后，以判断结果是否在控。 7.2 为了使检测结果在同一实验室的不同时期具有可比性，必须使用标准品或参比血浆进行 室内质量控制。 8.参考区间 PT:10-14 秒。待检者的测定值较正常对照延长 3 秒以上有临床意义。 APTT:22-38 秒。待检者的测定值较正常对照延长 10 …… 此处隐藏：3396字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……