正相色谱柱的使用

正相色谱柱使用,维护,再生。帮助新使用色谱柱的更正确的使用

正相液相色谱柱的使用与维护色谱柱分类

正相色谱柱活化

色谱柱冲洗与再生

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用硅胶的正相模式

分离模式的选择溶于正己烷 用键合相的正相模式 溶于甲醇或甲醇/ 溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/ 或乙腈或乙腈/水 用键合相的反相模式 用键合相的反相模式 分子量<2000 分子量<2000 溶于四氢呋喃 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式 溶于水 非离子化抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式

溶于有机溶剂

样品 离子化 用硅胶的正相模式 离子交换模式 溶于有机溶剂 分子量>2000 分子量>2000 溶于水 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱 大孔填料的离子交换模式 用大孔填料的反相模式

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正相色谱正相吸附色谱极性:固定相 > 流动相 极性 固定相 固定相 - 极性 流动相(己烷, 流动相 己烷 庚烷)- 非极性 极性物质后出峰 极性物质后出峰

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正相色谱柱的特点正相色谱比反相色谱柱压低 使用的溶剂容易旋蒸除去

吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有 机化合物在B型球形硅胶 机化合物在 型球形硅胶, Diol和PEG 型球形硅胶 和 正相液相色谱柱上的峰形。 正相液相色谱柱上的峰形。

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色谱柱的分类高效反相液相色谱柱 高效正相液相色谱柱 高效亲水液相色谱柱 高效离子交换液相色谱柱

按固定相 作用性质 分类

InnovationTM高效多功能液相色谱柱 高效多功能液相色谱柱 高效手性液相色谱柱 高效GPC凝胶液相色谱柱 高效GPC凝胶液相色谱柱 GPC 高效Hilic液相色谱柱 高效Hilic液相色谱柱

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色谱柱的分类硅胶基质柱

按基质材 料分类

聚合物柱 ZrO2柱等

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色谱柱的分类毛细管柱 微柱 窄径柱

按柱子尺常规柱

寸分类半制备柱 制备柱

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正相液相色谱柱1、氨基柱 、 2、硅胶柱 、 3、氰基柱 、 4、Diol柱 、 柱 绝不可沾 水 正反相使 用均可

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正相色谱柱的活化活化注意要点： 活化注意要点： 保存溶剂： 的正己烷： 1、保存溶剂：一般正相新柱出厂是用95%的正己烷：5%乙 醇或纯异丙醇或正己烷保存； 醇或纯异丙醇或正己烷保存； 例外：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱， 例外：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱， 一些厂家就用纯甲醇封柱。 一些厂家就用纯甲醇封柱。 2、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速：0.2mL·min-1;先 、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速： 流路后过柱； 后换上流动相； 流路后过柱；约0.5h后换上流动相；若有缓冲盐，则应先 后换上流动相 若有缓冲盐， 用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。 用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。

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氨基柱柱效检测流动相： %乙酸乙酯+ % 流动相：10%

乙酸乙酯+90%正己烷 流速： 流速：1.0mL·min-1 标准溶液：乙苯(或甲苯)+ )+苯甲酸甲酯 标准溶液：乙苯(或甲苯)+苯甲酸甲酯 检测波长： 检测波长：254nm 参考(标准 标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱 参考 标准 液相色谱仪测试用标准色谱 柱

此方法同时适用氰 基柱、 基柱、硅胶柱

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氨基柱使用后冲洗正相条件适用后： 正相条件适用后： 首先50倍柱体积异丙醇(注意低流速) 首先 倍柱体积异丙醇(注意低流速) 倍柱体积异丙醇 其次50倍柱体积甲醇 其次 倍柱体积甲醇 最后异丙醇过渡到正相流动相条件 柱子长期不用的情况下， 柱子长期不用的情况下，冲洗干净后用异丙醇或者 正己烷保存。 正己烷保存。

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色谱柱再生柱子使用一定时间后：柱效下降、 柱子使用一定时间后：柱效下降、老 化，可以用以下方法清洗柱子恢复柱 性能 方案1:依次用甲醇、异丙醇、氯仿、 方案 ：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷 、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子(各以 0.5ml/min的流速，20倍柱体积),再换流动 的流速， 倍柱体积 倍柱体积) 的流速 相

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色谱柱再生方案2:清洗时依次用 倍柱体积的下列溶液冲 方案 ：清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲 洗：95%水/5%乙腈 THF四氢呋喃 95%乙腈 % % 四氢呋喃 %乙腈/5 %水 再走流动相即可

若反相使用后柱效下降再生冲洗方法同上过程，并保 若反相使用后柱效下降再生冲洗方法同上过程， 持95%乙腈 %水继续冲洗，以低流速 %乙腈/5%水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min 过夜冲洗

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色谱柱再生(除水再生) 色谱柱再生(除水再生)诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状， 诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归 固定相的改变，但是填料可能还是完好的。 因于 固定相的改变，但是填料可能还是完好的。这是因 除水方案：用含2.5 % 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane 二甲氧基丙烷( 除水方案：用含 为正相色谱固定相的水分含量常常是个影响选择性的关键 冰醋酸的正己烷冲洗色谱柱30个柱体积 个柱体积， )和2.5 % 冰醋酸的正己烷冲洗色谱柱 个柱体积，可以 参数 ，大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分 ，柱子在 去除色谱柱中水分并恢复色谱柱原来或所需要的选择性 长期使用后吸附的水分使柱效下降， 长期使用后吸附的水分使柱效下降，此时应除水使柱效恢 复。

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氰基柱的使用氰基柱作反相色谱，操作和维护和C18柱完全相同 ， 氰基柱作反相色谱，操作和维护和 柱完全相同 氰基柱用于正相使用时没什么问题， 氰基柱用于正相使用时没什么问题，当柱子使用一定 但

是与氨基柱一样，反相使用时-NH2与 -CN会水解。 会水解。 但是与氨基柱一样 ， 反相使用时 会水解 时间后，柱效下降，老化， 时间后 ，柱效下降， 老化 ，可按如下清洗方法恢复柱 尤其 pH在1.5-7.0范围以外这种极端酸性或碱性条件下 在 范围以外这种极端酸性或碱性条件下 性能。清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗 倍柱体积的下列溶液冲洗： 性能 。 清洗时依次用 倍柱体积的下列溶液冲洗： 氯 柱寿命会下降很快，使用时应注意。 柱寿命会下降很快，使用时应注意。 异丙醇、二氯甲烷再走流动相即可。 仿、异丙醇、二氯甲烷再走流动相即可。

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附录： 附录：色谱柱柱内体积和平衡时间色谱柱 尺寸 (mm) 4.6 …… 此处隐藏：2226字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……