同时检测两种对虾病毒和4种弧菌的同步PCR方法的建立

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第 2 9卷第 4期2 0年 0 8

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Vo1 2 NO 4 . 9, .Au g., 0 20 8

8月

M A R I E SH ERI N FI ES RESEA R CH

同时检测两种对虾病毒和 4种弧菌的同步 P R方法的建立 C许拉黄健戈蕾。杨冰 (农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所，岛 2 6 7 ) 青 6 0 1(上海水产大学生命科学与技术学院， 0 0 0。 209 )

(中国海洋大学生命科学与技术学部，岛 260)。青 6 0 3

摘要

通过检索、多重比对、分析和筛选 Ge B n n a k中对虾白斑综合征病毒 ( S、染性皮下和 WS V)传

造血器官坏死病毒 (HHNV)副溶血弧菌、 I、创伤弧菌、维氏弧菌和溶藻胶弧菌的基因序列，计了哈设

1 0对特异性引物，已知毒株和菌株的 D以 NA为模板进行 P R,能扩增出与实验设计相符合的 C均D NA片段， P R扩增条件进行优化，立了可同时检测鉴别 WS V、HHNV、溶血弧菌、伤对 C建 S I副创弧菌、维氏弧菌和溶藻胶弧菌，哈并且能同时区分 WS V不同地理毒株的同步 P R方法。研究结果 S C

表明，方法检测特异性好，测通量大，合于对虾多种病原的同时检测。该检适关键词中图分类号对虾 P R C 检测病毒弧菌文章编号 1 0—0 5 2 0 ) 40 3— 7 0 07 7 (0 8 0—0 90￥ 4 . 6 95 4 文献识别码 A

De e o m e f s nc o o s PCR o i u t n o s d t c i n o v lp nto y hr n u f r s m la e u e e to f t i u e n o r Vi r o n p n e d s i p wo v r s s a d f u b i s i e a i hr m XU La, H UANG i Je GE i, YANG n Le。 Bi g

( Ke a o a o y o u t i a l i z t n o a i e Fih re s u c s y L b r t r fS sa n b e Ut ia i fM rn s e i s Re o r e,M i it y o

rc lu e l o n s r fAg iu t r,

Yelw e s eisRe e r hI siue l o S aFih re sac n t t,Chn s a e fFih r ce c s t ie eAc d my o s ey S in e,Qig a 6 0 1 n do2 6 7 )( Cole fA qu -ie Sce ean c ol y, S ngh iFi h re n v r iy, 00 0) lge o a l inc d Te hn og f ha a s e is U i e st 2 09

(Ke a . fM a iu r iity o u ain,Oca ie st fC ia。 y L b o rc hu eM nsr fEd c t o en Unv riyo h n,Qig a 6 0 3 n d o2 6 0 )

ABS TRACT

The c nd to fa s nc r n us p l m e a e c a n r a to ( o ii ns o y h o o o y r s h i e c in PCR )m e h d wa to s

o t ie osm u tn o sy d t c i a h g n,icu ig wh t p ts n r m evr s( S V) p i z d t i la e u l e e tsxp t o e s n l d n i s o y d o iu W S m e o i e e t g o o ia t is i fc iu y o e m a n e a o o ei n c o i vr s ( H fdf rn e l gc lsan, n e to s h p d r la d h m t p it e r ss iu f c I H—

NV),Viro p r h e l tc s,V. a g oy iu,V. h r e i b i a a a moy iu l n l tc s a v y,V. v li iu r m e ai u nf c sfo p n eds i p Te a r fs cfc prme s we e d sg d b s d o e r h,muli l o p rs n,a hrm . n p is o pe ii i r r e i ne a e n s a c tp e c m a io— n l ss a d s l c i n o he s q e c s o SSV,I HN V, a y i n e e to ft e u n e fW H V. par h mo ytc s t x ge e, . a ae l i u o R n V

v l i iu o R g n,V. h

r e itx e e V. ag oy iu s 6 e e i Ge B n .Th u nf c stx e e a vy o R g n, l n l t sh p 0 g n n n a k c e农业部引国际先进科学技术计划 (4 )(0 5Z 0、进 9 8 2 0一S )国家高技术研究发展计划 ( 6 )目( O 6 83项 2 O AA1 O O )国家专项 98O一 H3共同资 O36和 0一1Z助

*通讯作。E malh a gi@ y fia . n Te: 0 3 ) 5 2 0 2者— i un j: e sr c c, l ( 5 2 8 8 3 6 .: 0 40; 2 2 0—63收稿日期 0 7 0 6接受日期： 0 7 0—0:许作者简介

拉 (9 1)男，士研究生，要从事水产动物医学研究。E malx l 17 0 h t i cm, e:3 7 8 2 4 1 8一，硕主 i ua 0 2@ omal o T l16 8 4 1 7: 8 .

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第2 9卷

PCR e u t ho d t ta ls m p e o a n d pa ho e i r s ls s we ha l a l s c nt i e t g n cDNA o l e a p ii d i t p cfc c u d b m l e n o s e ii f

b nd h tm a c d t e i n Th s me h d wa r v d t u t bl o i la e us d t c a s t a t he he d sg . i t o s p o e o be s ia e f r smu t n o e e—to fv ro s p t o n t i h s cfct nd t r u pu . i n o a i u a h ge s wih h g pe iiiy a h o gh t KEY ORDS W Pe a i hrm p n ed s i PCR De e to t cin Viu rs Vi r o b i

对虾白斑综合征病毒 ( i p tsn rmevr s Wht s o y do i,WS V)传染性皮下和造血器官坏死病毒 (net u e u S、 I fci s oh p d r l n e tp i i n co i vr s I y o ema a dh mao oe c ers i, HHNV) t s u都是近年来引起对虾病毒病暴发流行的主要病毒。国 际兽疫局 ( I将此两种病划为须向其申

报的甲壳类重要疾病。国内外学者对其进行了大量的研究，它们 O E)对

的生物学和病理学都有了较为详尽的了解 ( n t 1 2 0; a l ne a . 2 0; o r u ze a . Ya g e a . 0 1 v n Hut t 1 e 0 1 R d i e t 1 g 20。 0 3)

副溶血弧菌 V b i p r h e l t u是人们在养殖对虾中发现最早的弧菌 ( n ezn t 1 1 7 ) iro a a a moyi s c Va d ra t . 9 0, ea

随后溶藻胶弧菌 V.a g oyiu、 l n l t s哈维氏弧菌 V.h re i创伤弧菌 V.v li i s c a vy和 unf c等弧菌陆续被发现。弧 u菌属细菌所引起对虾疾病的症状极为相似，属差别较小，种几天内可导致对虾的大量死亡 (陶保华等 2 0 ) 01。近年来对虾病毒和细菌的检测方法发展较快 ( ihn re a . 1 9 )目前对虾疾病诊断手段主要包括 Lg te t 1 94。病理学和生物学方法、疫学方法、免分子杂交方法及 P R方法等，中 P R方法是这些方法中特异性最强、 C其 C敏感性最高的病原检测方法，广泛应用于对虾疾病的检测和诊断。wS V和 I被 S HHNV均有 P R检测方法的 C 报道 (徐洪涛等 19; 9 9史成银等 20; 0 3杨冰等 2 0; n t 1 2 0 )各种对虾弧菌病也有 P R和 0 5 Ya ge a . 0 6, C

免疫检测的报道 (李天道等 1 9;晓龙 2 0 ) 9 8贺 0 6。也有报道应用多重 P R技术同时检测 2 3种对虾病毒 C~病(谢芝勋等 20; 0 5徐丽美等 20 ) 0 5。但对虾在养殖过程中往往会同时受到不同病毒和细菌的侵染。本文首先在 Ge B n n a k中检索、比对、析、选对虾 1 Sr分筛 6 DNA、 S I WS V、HHNV、副溶血弧菌、伤弧菌、创哈维氏弧

菌和溶藻胶弧菌的序列，用 Al l D 3 0软件设计出 1引物，应 l e . eI 0对其退火温度等参数十分相似，使用同一个能P R反应程序扩增，立了同步 P R方法。经验证， C建 C该方法能同时检测出 WS V和 I S HHNV两种病毒以及副溶血弧菌、伤弧菌、创哈维氏弧菌和溶藻胶弧菌 4种弧菌。

l材

料和方法1 1实验样品 .

白斑综合征病毒 ( S WS V)DNA、染性皮下和造血器官坏死病毒 (HHNV)DNA、溶血弧菌 V b i传 I副 irop r h e lt u、伤弧菌 V.v l iiu、 a a a moy i s创 c un …… 此处隐藏：15360字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……