植物组织培养实验报告(2)

后将拇指压住的绳头一端向上拉紧。

5. 取出接种后的锥形瓶。然后在牛皮纸上注明接种的时间、外植体的名称，及具体的

制作人姓名。

6. 将自己用过的实验仪器在酒精中侵泡，然后灼烧灭菌，为下一次接种做准备。 7. 等上述一切操作完成后，从超净工作台上取下锥形瓶，放置于培养架，调节培养温

度后进行培养。

注意：整个过程都要在超净工作台下操作，且瓶子一定要扎紧，防止在培养过程中杂菌进入锥形瓶导致菌污染。

三、豌豆种子的生长状况

豌豆种子接种后，在培养基上将会生长，每个种子的发芽时间不尽相同，且有些种子在生长过程中由于受到杂菌的菌害而死亡。因此我们有必要在豌豆种子的生长过程中进行观察和记录，得到发芽率和生长率。 3.1豌豆种子的发芽率

不同的种子发芽率也不同，决定种子萌发的因素有很多，有的种子在休眠期不能发芽，有的已经死亡。温度也是决定种子发芽的重要因素。因此，在实验中，掌握种子的发芽率是至关重要的。

3.1.1豌豆种子的发芽数目

发芽过程中，发芽的结果是一个较为重要的指标。在接种后，培养的豌豆种子在一段时间之后开始逐渐发芽。为此，我进行了详细的统计，并得出了以下的结果:

在培养了四天之后，培养基较适中【1】的一个接种瓶中的四颗中有一颗开始发芽，剩下的七颗都有发芽迹象。到第六天，前面发芽一棵的那一瓶中的种子全部都发芽，而另外一瓶中有发芽迹象的四颗豌豆都没发芽。九天之后，已经发芽的培养瓶中的豌豆已经出现了较长的茎和较为粗壮的跟，只是根毛很少，有些甚至没有根毛，而培养基较多【2】的一瓶中只有两颗豌豆出现了少量的根和少量的茎，且长势较弱。

注: 【1】培养基较适中是指在50毫升的的锥形瓶中装有20毫升左右的培养基。

【2】培养基较多是指在50毫升的锥形瓶中装有超过25毫升的培养基。 3.1.2豌豆种子的发芽率

在第二次接种前，八颗豌豆种子有七棵发芽，一颗豌豆根部坏死。此次培养豌豆种子的发芽率为：

7/8*100%=87.5%

3.2豌豆种子的菌害率

在豌豆种子的培养过程中，有时由于操作时不小心带入的杂菌会引起整个培养体系的污染，使得豌豆种子无法生长或者生长过程中营养不足而死亡，这可能引起实验结果的改变，因此，我们必须对此进行严格的控制和记数。由于本组实验中豌豆种子没有出现菌害的现象，因此，菌害率可以看做是零。

四、在种子的培养过程中我们得到的结论

在进行为期一个月的组织培养之后，我能可以从中得到以下结果： 4.1外界的气流运动影响无菌苗的生长。

在豌豆种子培养过程中，我发现培养架上下层三角瓶之间，左右层三角瓶之间，豌豆种子的发芽率都呈现出一种规律性变化，中层的豌豆长势明显没上层和下层好，靠近通风口的豌豆长势明显没培养架里面的长势好。在对众多环境因素进行逐一分析后，我们可以断定，造成这种变化的原因是：气流的运动引起气温的短暂性降低。在培养架中间、通风口处，由于人的经常在其间走动，而这必将引起气流的运动，从而引起局部性的气温变化。久而久之，会导致种子在发芽过程中出现一定的局部性差异。实验结果见下图1： 4.2培养基的深度影响种子的生长。

在豌豆种子的培养过程中，想让锥形瓶中培养基的量都相等是不可能的。往往由于操作人员对实验的操作技巧掌握不够成熟，导致每个锥形瓶中装入培养基的量不尽相同（换言之，每个培养瓶中培养基的量有的多，有的少）。按照常规的想法来看，培养基的量只要在一定的量程范围内就不会引起植株之间的差异。可是在本实验中，我观察到培养基的量对豌豆植株的影响是很大的。当培养及刚好能够覆盖瓶底时，接种的豌豆种子不生长，或生长很少，且长势较差；当50毫升锥形瓶中培养基约有20毫升时，植株长势最好，最健壮，根茎叶发育比较协调；当超过25毫升时，茎和叶长势一般或较差，而根却比其他两种条件下的长势都好。对此现象进行分析，可知培养基的深度在一定程度上会引起无菌株的发育，改变其分化过程。或许是某一矿质离子诱发植株体内产生了某一类生长调节物质，从而导致这种现象的产生，对此，由于目前知识的匮乏，我无法给出详细的解释。 4.3在同一个三角瓶中，种子之间的发芽可以相互诱导

在植物组织培养过程中，我们经常会碰到这样的一些现象：在不同的锥形

瓶中，有一些瓶子中所有的种子全部都发芽；有一些瓶子中种子全部都不发芽；而在同一个瓶子中，既有发芽的又有没发芽的情况却很少见；到底是什么情况致使植物体在同样的环境条件下产生不同的实验结果呢？经过对豌豆种子的培养实验的观察和大量的推断后，一个令人很难置信的结论在我脑中成型——种子之间的发芽可以相互诱导。在上述实验过程中我们观察到一个瓶子中要是有一粒种子发芽，其他的在两天之内几乎都会发芽，若不发芽，则不发芽的这粒种子永远不会发芽。若是一个瓶子内四个种子在六天之内没一个种子发芽，那么这瓶子里的种子在以后发芽的概率很小。对此，我们就可以推测，在种子萌发的过程中可

能会产生一些刺激种子萌发的物质，而这些物质能引起种子的发芽，或者说，这种物质能诱导种子的萌发。

从以上的介绍中，我们可以看出，引起植株产生诱导效应的的物质似乎存在，一些研究者 如有兴趣的话，可以深入的探讨。期待新的发现！

上图为通风口处三角瓶

下图为内层三角瓶

图

五、豌豆茎和叶的组织培养过程 5.1培养基的制取

用于培养豌豆茎和叶的培养基和种子培养基的成分差异很小，培养基的制作过程相差也很小。在这里我将部分有差异的步骤列出来，其他制作过程直接参照豌豆种子培养过程中的制作方法即可。