植物组织培养实验报告

甘肃农业大学 以豌豆为材料进行植物组织培养 从豌豆种子的接种到愈伤组织的再生 赵学荣 2013.10. 生命科学技术学院生物技术（植物方向） 730070

以豌豆为材料进行植物组织培养

赵学荣

摘要：利用一些简单的实验操作技术、统计计算和作图方法。在灭菌、接种、组织培养等试验方法的基础之上来了解在组织培养过程中豌豆的生活状态，生长条件和存在环境。这将为自己以后的学习和研究提供更好的技术保障。

关键字：豌豆；组织培养；

【1】

豌豆属于豆科植物，起源于亚洲西部、地中海地区和埃塞俄比亚、小亚细

亚西部。因其适应性很强，在全世界的地理分布很广。豌豆在我国已有两千多年的栽培历史，现在各省均有栽培。全国耕种面积广大，是农民增收的渠道之一。

豌豆是一年生缠绕草本，高90～180cm，全体无毛。小叶长圆形至卵圆形，长3～5cm，宽1～2cm，全缘；托叶叶状，卵形，基部耳状包围叶柄。荚果长椭圆形，长5～10cm，内有坚纸质衬皮；种子圆形，2～10颗，青绿色，干后变为黄色。花果期4～5月。偶数羽状复叶，顶端卷须为叶卷须，托叶呈卵形。花白色或紫红色、单生或1～3朵排列成总状腋生，花柱内侧有须毛，闭花授粉，花瓣蝴蝶形。荚果长椭圆形或扁形，根据内部有无内层革质膜及其厚度分为软荚及硬荚。豌豆种子可呈圆形、圆柱形、椭圆、扁圆、凹圆形，每荚2～10颗，多为青绿色，也有黄白、红、玫瑰、褐、黑等颜色的品种。可根据表皮分为皱皮及圆粒，干后变为黄色。根上生长着大量侧根，主根、侧根均有根瘤。因其性状多样且为闭花授粉，孟德尔将其作为遗传因子实验的作物。豌豆味甘、性平，归脾、胃经，具有益中气、止泻痢、调营卫、利小便、消痈肿、解乳石毒之功效。对脚气、痈肿、乳汁不通、脾胃不适、呃逆呕吐、心腹胀痛、口渴泄痢等病症，豌豆具有一定的食疗作用。豌豆作为一种食材，有多种制作方法：

1. 豌豆可作主食，豌豆磨成豌豆粉是制作糕点、豆馅、粉丝、凉粉、面条、风味小吃的原料，豌豆的嫩荚和嫩豆粒可菜用也可制作罐头。

2. 豌豆粒多食会发生腹胀，故不宜长期大量食用。豌豆适合与富含氨基酸的食物一起烹调，可以明显提高豌豆的营养价值。

3. 许多优质粉丝是用豌豆等豆类淀粉制成的，在加工时往往会加入明矾，经常大量食用会使体内的铝增加，影响健康。

4. 炒熟的干豌豆尤其不易消化，过食可引起消化不良、腹胀等。 5. 应用于消渴：豌豆适量，淡煮常吃。

豌豆喜冷冻湿润气候，耐寒，不耐热，幼苗能耐5℃低温，生长期适结荚期适温15～20℃，超过25℃受精率低、结荚少、产量低。在了解这些基本情况之后，我们应该大力开发、利用和改造豌豆。而要实现这个目标，我们就应该对豌豆进行组织培养，来扩大培养面积，以便更深、更好的了解其生活习性，掌握其

生长状况，为进一步开发利用豌豆提供理论依据和技术保障。

注：

【1】摘自百度文库：由中国植物图像库（中国科学院植物研究所）提供

一、材料与方法 1.1实验材料

豌豆种子材料由老师提供，已经经过春化作用和水的侵泡，并且进行了消毒处理（具体方法：将豌豆种子用次氯酸钙、双氧水、硝酸银溶液依次进行浸泡灭菌。在灭菌后，用无菌水冲洗几分钟，然后在低温条件下进行保存处理。注意:一定不能用没有用无菌水冲洗的种子进行接种，其主要原因是防止残留的消毒药物对豌豆种子造成影响。）。然后在低温条件下进行无菌保存，为接下来的实验做准备。 1.2研究方法

1.2.1 MS培养基的母液的制备方法

1. MS培养基母液的配制和保存，MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配置培养基都要对着几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原来量的10倍或100倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。 2.按配方表配置MS培养基母液：大量元素100倍，微量元素配100倍，铁盐，有机成分配成100倍，母液储存于4摄氏度的冰箱中。激素配成浓度为o.1mg/ml.

3.配制的各种母液成分按顺序加入，上一成分溶解后再进行下一成分的溶解。钙盐和铁盐都单独配置。生长素配制时，先用微量1摩尔的NaOH溶解，再以蒸馏水定容；赤霉素配制时，先用微量0.1molHCl溶解，再以蒸馏水定容。 1.2.2 MS母液配制取量表

母 项 目 液 扩大倍数 定容体积(ml) 500 配一升的吸取量（ml） 20 称取量mg NH4NO3(41.25) KNO3(47.5) KH2PO4(4.25) 大量 50 MnSO4.4.H2O(0.558) ZnSO47H2O(0.215) H3BO3(0.155) 微量 50 500 20 KI(0.0208) Na2MoO4H2O(0.0063) CuSO45H2O(6.25*10-4) CoCl2H2O(6.25*10-4) 铁 50 500 20 FeSO4.7H2O(0.695) Na-EDTA(0.933) 镁 钙 有机 50 50 100 500 500 200 20 20 10 MgSO4.7H2O(9.25) CaC2l.2H2O(11.0) 甘氨酸（0.04） 盐酸吡哆醇（0.01） 盐酸硫胺素（0.008） 烟酸（0.01） 肌醇 激素 100 200 200 50 10 5 肌醇（2.0） 2,4-D(0.1*10-3) GA(0.5*10-3) 白砂糖 30克 琼脂 5克 备注：1.钙液的母液量由于易沉淀所以取11g 2.微量溶液取量太少，所以先取12.5mg溶于10ml水，再取1ml溶解稀释 1.2.3注意事项 （1）药品的质量问题 （2）如药品所带结晶水不同，应进行换算。 （3）称量必须准确，一般用1/10000的电子天平进行称量，特别是微量元素和激素，但有些药品可用粗天平称量，如蔗糖、琼脂等。 （4）所用的水必须纯净，一般用全玻璃蒸馏器二次蒸馏的重蒸水或者达到一定标准的无离子水。 （5）铁盐、有机物均需配置母液，在配制母液时应注意防止沉淀产生。药品应采用纯度等级较高的分析纯或化学纯，以免带入杂志和有害物质而对培养材料产生不利的影响。

（6）配制母液时，所用的溶液要用纯度较高的蒸馏水或去离子水，药品称量、定容都要准确。

（7）制备好的浓缩液应保存在冰箱中，储备液配置量要依据使用频度而定，一般所制备的储备液最好于1-2个月内使用完，不宜过长时间保存，尤其是生长调节物质和有机物更应该如此。若各类母液一旦出现沉淀或可见的微生物污染，应立即停止使用，重新配置。 1.2.4培养基的配置 培养基的配置过程：

1. 配置培养基时一般是将已经配置好的各种母液按顺序排好，根据母液倍数或浓度计算和吸取相应量的各种母液和生长调节物质，计算和称取一定量的琼脂和蔗糖，加入到含有水的容器中加热，不断的搅拌使琼脂完全溶解后结束加热，然后加水定容。用1mol/LHCl和1mol/LNaOH调节PH至所需值，培养基要乘热分装于培养容器中，若用100ml的锥形瓶，每瓶分装20至50ml。分装时注意不要将培养基漏在容器壁或容器口上，防止杂菌污染。分装后应立即用封口膜或棉塞封口，培养基做好相应的标记。

2.为了尽量减少误差，必须严格按照上述的步骤进行操作。应当把培养基中各成分列入自己制的表格中，加入一种就划一种。所有盛装培养基的试管、玻璃管、玻璃瓶及其培养皿的标记都应当耐高温，以防止高压灭菌和长期储存后混淆。 3.培养基配置完后PH的调节。培养基的PH反映了培养基的酸碱度，直接影响外植体和培养材料对离子的吸收，所以过酸或过碱的培养基对培养材料培养基的生长都有很大的影响，此外，琼脂培养基的PH还影响到培养基的凝固状态。当配置好培养基后，应立即进行PH的调节。最好用酸度计测试，其准确度高，对精密试验等研究工作有利。若无此设备或开展育苗和生产工作，可直接用精密PH试纸进行检测。PH试纸应保存于干燥的器 …… 此处隐藏：4200字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……