实验室DNA提取方法（盐酸胍最终版）

实验室DNA提取方法

试剂准备：

1. 红细胞裂解液：

NH4CL 8.26g Na2EDTA 37mg KHCO3 1.00g 去离子水 至1L

过0.22um滤膜

2. SDS SDS: 10g 去离子水： 至100ml

3. 盐酸胍

盐酸胍 72g

1M Tris-HCL 10ml（1.21g）去离子水 至100ml PH 8.0

4. 蛋白酶K（每瓶100mg）

每瓶加去离子水10ml，终浓度为

5. 无水乙醇，70%乙醇

1X TE（PH 8.0）

① PH 8.0 10mM Tris-CL 1.211g/1L水 ② PH 8.0 1mM EDTA 0.5M EDTA

2ml（0.326g）

把②加到①即可 10mg/ml

DNA提取Protocol：

1、 准备工作：准备三个试管架，其中一个放血样，其余两个标记待用，打开水浴箱，70℃； 2、 血样拿出来溶解；

3、 记下血样的号码到册子上 ；

4、血样溶化后，将血样转移到10ml试管中；

5、加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀（振荡）；（通常加两倍血样体积的裂解液）； 或者：

1. 1. 5ml血液（EDTA抗凝），离心2500rpm，10min；

2. 弃上清，加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀；

6、室温放置 10min后离心，3000rpm，10min （接着做第二份）

7、弃上清液，加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀（剧烈振荡）； 8、室温放置 10min后离心，3000rpm，10min（可以适时放置5-7分钟） 9、弃上清液，加双蒸水 800ul，弹开管底沉淀（涡旋进行）；

10、依次加：蛋白酶K 60ul；SDS 300 ul（涡旋下）；盐酸胍 300 ul；

11、放入70℃水浴中1小时，前15min要充分振荡三次（即每隔五分钟振荡一次，涡旋）； 12、水浴过程中准备两份的EP管并标号；

13、从水浴中拿出试管，冷却，离心3500rpm，3min； 14、将上清液移至 1.5ml离心管中，离心13000rpm，10min

15、取上清液放置于10ml试管中，加2.5倍预冷的（-20度）无水乙醇（约3ml），振荡，

可见 DNA沉淀；

16、用吸管吸出DNA沉淀放置于1.5ml离心管中；

17、加预冷的（-20度）70%乙醇1.6ml左右，洗两次（第一次加950 ul，第二次加650 ul），

离心13000rpm，30s； 18、室温下晾干；

19、晾干后用适量容积的TE溶解（约300ul）；