微核实验-毒理学-洋葱根尖染色体观察(2)

分组 表1 试验结果统计 细胞总前期数中期数后期数末期数微核数 数 目 目 目 目 清水 50mg/L Gr6+ 100mg/L Gr6+ 150mg/L Gr6+ 30mg/L 1,2,4-三氯苯 3840 3784 3766 5327 3380 34 12 0 12 25 27 29 10 21 6 14 6 0 4 21 21 34 12 8 1 21 1 0 11 20 38 38 31 19 5 3 2 0 2 5 16 10 32 4 2 3 14 27 7 7 6 7 6 5 4 40mg/L 1,2,4- 3905 三氯苯 50mg/L 1,2,4- 4400 三氯苯 50mg/L Gr6+和30mg/L 1,2,4-三氯苯 100mg/L Gr6+ 和40mg/L 1,2,4-三氯苯 150mg/L Gr6+ 和50mg/L 1,2,4-三氯苯 3505 4166 3987 分组

表2试验计算结果 前期数目 中期数目 后期数目 末期数有丝分微核率 目 裂指数 0.08% 0.36% 0.078% 清水 0.88% 0.36% 0.55% 50mg/L Gr6+ 100mg/L Gr6+ 150mg/L Gr6+ 0.32% 0 0.23% 0.16% 0 0.08% 0.62% 0.54% 0.77% 0.34% 0.19% 0.025% 0.03% 0 0.21% 0.59% 0.097% 0.86% 0.88% 0.46% 0.125% 0.06% 0 0.04% 0.15% 0.41% 0.23% 0.91% 0.10% 0.05% 30mg/L 1,2,4- 0.74% 三氯苯 40mg/L 1,2,4- 0.69% 三氯苯 50mg/L 1,2,4- 0.66% 三氯苯 50mg/L Gr6+和30mg/L 1,2,4-三氯苯 100mg/L Gr6+ 和40mg/L 1,2,4-三氯苯 150mg/L Gr6+ 和50mg/L 1,2,4-三氯苯 0.29% 0.5% 0.15% 0.16% 0 0.075% 0.62% 0.54% 0.78% 0.34% 0.12% 0.025% 0. 37% 0. 72% 0.13% 0.2% 0.15% 0.12% 0.17% 0.19% 0.1% 1,2,4-三氯苯0.90%0.80%0.70%0.60%0.50%0.40%0.30%0.20%0.10%0.00%-通用格式-通用格式-通用格式-通用格式-通用格式-通用格式-通用格式mg/L微核率有丝分裂指数1,2,4-三氯苯和Gr6+0.40%0.35%0.30%0.25%0.20%0.15%0.10%0.05%0.00
2mg/L34微核率有丝分裂指数

图5-1

5.1、Gr和1,2,4-三氯苯对大蒜根尖细胞有丝分裂的影响和微核率的影响

如图5-1所示，单独使用1,2,4-三氯苯处理大蒜根尖的实验组，有丝分裂指数先降低后增大，在浓度为40mg/L的时候达到最小值，可见，1,2,4-三氯苯对大蒜根尖分生细胞有丝分裂有着显著地影响，但是要受到1,2,4-三氯苯浓度的限制，浓度40mg/L的时候对有丝分裂指数的影响最大。同时，随着1,2,4-三氯苯浓度的增加，微核率逐步下降，浓度分别为30 mg/L、40mg/L、50mg/L的1,2,4-三氯苯处理过的微核率分别为0.2%、0.15%、0.12%，清水对照组的为0.078%，与清水对照组相比，经过1,2,4-三氯苯处理过的根尖的微核率有显著提高。

单独使用Gr6+处理打算根尖的实验组，，随着Gr6+浓度增加，细胞有丝分裂指数呈逐步递减状态，且在浓度为50mg/L的时候，细胞有丝分裂指数为最大值为0.16%，但是，与清水对照组0.36%的有丝分裂指数相比，大蒜根尖有丝分裂

6+

指数明显降低，意味着Gr能有效的抑制大蒜根尖细胞的有丝分裂。随着处理物质Gr6+浓度的增加，大蒜根尖细胞的微核率呈现增大再减小状态，在100mg/L的时候，微核率达到最大。浓度分别为50 mg/L、100mg/L、150mg/L的Gr6+处理过

6+

Gr6+0.80%0.70%0.60%0.50%0.40%0.30%0.20%0.10%0.00%-通用格式-通用格式-通用格式-通用格式-通用格式mg/L微核率有丝分裂指数的微核率分别为0.37%、0.72%、0.13%，清水对照组的为0.078%，可见，经过Gr6+处理过的根尖的微核率有显著提高。

在Gr6+与1,2,4-三氯苯共同作用的实验组，随着Gr6+与1,2,4-三氯苯处理浓度的增加，微核率先增后减，在处理浓度为100mg/L Gr6+ 和40mg/L 1,2,4-三

氯苯的时候，微核率达到最大值，大蒜根尖分生细胞有丝分裂指数逐步下降，浓度为50mg/L Gr6+和30mg/L 1,2,4-三氯苯、100mg/L Gr6+ 和40mg/L 1,2,4-6+

三氯苯150mg/L Gr和50mg/L 1,2,4-三氯苯处理的大蒜根尖有丝分裂指数为0.34%、0.12%、0.025%，微核率为0.17%、0.19%、0.1%。微核率提高，有丝分裂指数下降。

大蒜根尖经过1,2,4-三氯苯处理，在形成微核同时，存在很多双核细胞这表明，1,2,4-三氯苯可以破坏细胞有丝分裂纺锤题的形成，从而导致染色体畸变。经过Gr6+处理微核率，细胞有丝分裂遭到阻滞，细胞基本处于有丝分裂间期，分裂期的细胞很少，微核率提高，同时产生大量的双核细胞、核崩解细胞以及赤道板偏移等畸变，染色体畸变严重。

在Gr6+与1,2,4-三氯苯共同作用下，阻滞细胞有丝分裂的情况更加明显，与清水对照组相比，微核率也提高；与单独使用Gr6+处理相比，微核率降低；与单独使用1,2,4-三氯苯处理相比，微核率增加。表明对于阻滞大蒜根尖细胞有丝分裂，Gr6+和1,2,4-三氯苯有协同作用，对于细胞微核率，有相互抑制作用。

6+

5.2、Gr和1,2,4-三氯苯对大蒜根尖细胞有丝分裂分裂周期的影响

有丝分裂各期细胞数目1.00%0.80%0.60%0.40%0.20%0.00345678910组别前期中期后期末期图5-2

组别：1为清水，2、3、4分别为50、100、150mg/LGr6+，5、6、7分别为30、40、50mg/L1,2,4-三氯苯，8、9、10分别为Gr6+和1,2,4-三氯苯混合物

6+

在经过24h处理之后，Gr组的细胞有丝分裂各期比例明显降低，1,2,4-三氯苯组分裂前期细胞比例基本不变，但是处于后、末期的细胞比例明显增大，分裂期中处于细胞后、末期时间延长。Gr6+和1,2,4-三氯苯混合浓度有丝分裂各期所占比例随着处理浓度的增加而递减，有丝分裂的阻滞作用越来越明显。

六、讨论

1、初步观察结果

经过初步观察统计，经1，2，4-三氯苯溶液处理过的根尖细胞，微核等染色体变异现象较少，且处于分裂期的细胞较少（与空白组比较）；Cr6+溶液处理过的根尖细胞，微核、双核、赤道板偏移等变异现象出现率均有所提高，但几乎找不到处于细胞分裂中期的细胞。

2、后面几组染色效果偏差：

在对根尖进行染色时，由于染色用的Schiff试剂已经配制了接近7天，染色能力可能有所下降，经染色的细胞核呈较淡的橘红色，并非明显的紫红色，染色的模糊可能会影响对高度螺旋的染色体的观察，导致观察Cr6+溶液处理的根尖细胞时，难以分辨出分裂期细胞，影响实验结果。还有一种情况就是解离过度，破坏了细胞结构，染色效果下降。

七、小结

两个星期的实验说长不长，说短不短，但却是我的大学学习中非常有意义的一次实验实践。通过大蒜根尖的培养、染毒、解离、染色、显微镜观察等一系列实验步骤，我掌握熟练了大蒜根尖的诱导培养方法、电子天平的使用和一些操作技巧、孚尔根染液的配制、大蒜根尖的解离制片的方法、显微镜的操作技巧以及相关软件的使用等一系列实验技巧。此外在师兄师姐的帮助指导下学会了pH计、分光光度计、浊度计等实验仪器的使用方法。

八、心得体会

两个星期的起早摸黑，我们付出的不过是少睡几个懒觉，晚点吃饭，但在这期间我们收获的却是比这些付出更有价值有意义的实验经验和心得体会。我认为此次实验的目的不在于实验结果，而在你是否认真亲自动手，在于自身在实验期间所掌握的实验技巧以及实验期间的点滴体会。

我的第一个体会便是关于实验器材的整理保管问题。我在此次创新实验之前除了课程所要求的实验外，基本没接触过其他的实验，更没有跟老师做项目的经验。所以对实验室非常的陌生，以至于在实验刚开始时连简单的实验器材都找不到更别说做实验了，最后还是老师帮我们订购了才得以继续实验。其实想想也是 实验室就那么大，一二十个人在做实验，你自己的实验器材 …… 此处隐藏：2905字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……