实验4-血清甘油三酯含量测定

生化实验

实验26 实验26

血清甘油三酯含量测定Assay of Triglyceride content生物化学与分子生物学系 陈园园

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实验目的掌握血清甘油三酯化学法测定的 基本原理及主要技术方法 了解血清甘油三酯含量测定的 正常值与临床意义

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实验原理皂化甘油三酯

+ KOH

60-70℃ ℃ 3 20min 钾皂

+甘油

氧化甘油

HIO4

2甲醛

显色+甲醛 乙酰丙酮 NH4+ 3,5-二乙酰 二乙酰-1,4二氢 二氢-2,6 二甲基吡啶 二乙酰 二氢 黄色带荧光) (黄色带荧光)

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实验步骤抽提依次加入蒸馏水 标准液、样品， 加入蒸馏水、 取3(或4)只小试管，依次加入蒸馏水、标准液、样品， ( ) 抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇10min,静置10min分层 抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇 ，静置 分层 注意： 注意：试管必须干燥

皂化

吸取上层液体0.5ml,加入对应的3 (或4)只大试管中， ,加入对应的 吸取上层液体 ) 加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀，65℃水浴 加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀， ℃水浴5min 注意：吸上层液时，务必当心， 注意：吸上层液时，务必当心，绝对不可吸入下层液体 分光光度计预热) (分光光度计预热)

氧化显色 比色

加入氧化试剂，充分混匀后， 加入氧化试剂，充分混匀后， 加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀， ℃水浴15min 加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀，65℃水浴

取出试管，流水 室温冷却 室温冷却， 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度 的吸光度

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分光光度计的使用样品池 波长 读数 拉杆， 档 拉杆，0-4档 1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档(空白管),T模式调 模式调100%,显示“Blank”、 档 空白管) 模式调 ，显示“ ” “100” ” 3. 拉杆拉至 档，T模式调 ，显示“0.00” 拉杆拉至1.5档 模式调0%,显示“ 模式调 ” 4. 换到 模式，拉至 、3、4档，读取各个样品的吸光度 换到A模式 拉至2、 、 档 模式， 毛面 光面

比色杯的使用

1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光从光面通过 、分清光面、毛面。手应接触毛面， 2、用溶液润洗 次，装至 至4/5体积 、用溶液润洗2-3次 装至2/3至 体积 3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面 、粗纸吸水、

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实验结果Lambert-Beer 定律 A1 c1 m1 终体积相同时) 标准管法 —— = —— = —— (终体积相同时) A2 c2 m2 A样品 ——— × m标准品 A标准品 样品TG浓度 样品 浓度 = ———————— V样品 mg/ml A样品 ——— × 1mg/ml ×0.2ml A标准品 = ———————————— 0.2ml mg/ml ————————— ×1000 mmol/L 摩尔质量g/mol (885) 摩尔质量 国际单位 正常参考值为0.30~1.7mmol/L 正常参考

值为

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注意事项抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 吸取上层液时不能吸入下层液； 选用小试管时试管口径不能太细； 选用小试管时试管口径不能太细； 试管使用时必须要干燥； 试管使用时必须要干燥； 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净， 枪头必须清洗干净，甩干

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临床应用血脂：血甘油三酯、 血脂：血甘油三酯、血胆固醇餐后甘油三酯会增高， 餐后甘油三酯会增高，检查时一定要空腹抽血 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高， 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高， 抽血前几天禁止饮酒 正常人血清甘油三酯水平有随年龄增高的趋势 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、 急性胰腺炎、 急性胰腺炎、原发性高甘油三酯血症及 动脉粥样硬化等