Wistar大鼠2型糖尿病动物模型的建立_艾静

高糖高脂实验鼠模型的建立

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2004Nov;20(11):1309~12 1309

实验方法学

Wistar大鼠2型糖尿病动物模型的建立

艾 静1,王 宁1,杜 杰1,杨 梅1,刘 萍1,杜智敏2,杨宝峰1

(哈尔滨医科大学1.药理学教研室 黑龙江省生物医药重点实验室;2.临床药理基地,黑龙江哈尔滨 150086)

中国图书分类号:R587 1;R363 332

文献标识码:A文章编号:1001-1978(2004)11-1309-04摘要:目的 建立2型糖尿病的动物模型。方法 给Wistar大鼠灌胃脂肪乳10d,记录饮食、饮水、体重变化,用毛细血管法和正糖钳技术判定胰岛素抗性。同时测定血清中空腹血糖、丙二醛(MDA)和游离脂肪酸(FFA); 采用不同的给药方式给灌胃脂肪乳大鼠腹腔注射四氧嘧啶,将72h后血糖值 16 7mmol L

-1

1.1.1 器材 ECOM F6124型半自动生化仪,Eppendorff公司;AEL 200型电子分析天平,LIBROR公司;800型普通离心机,上海手术器械十厂;台式电子天平,美国双杰兄弟集团有限公司。

1.1.2 药品 四氧嘧啶(alloxan),Sigma公司;短效胰岛素,上海第一生化药业公司;游离脂肪酸和丙二醛试剂盒,南京建成生物工程研究所。

1.1.3 动物 正常成年Wistar大鼠, ,体重为180~220g,由哈尔滨医科大学附属第二临床医院动物中心提供。1.2 实验方法及测定指标

1.2.1 Wistar大鼠胰岛素抗性的判定

1.2.1.1 脂肪乳的制备 猪油占20g,甲基硫氧嘧啶1g,胆固醇5g,谷氨酸钠1g,蔗糖5g,果糖5g,吐温8020ml,丙二醇30ml,加水定容至100ml,配成脂肪乳。

1.2.1.2 试验分组 取Wistar大鼠24只,随机分为正常组和高脂组,每组12只。正常组每天灌胃普通饮用水,高脂组灌胃脂肪乳,共10d。

1.2.1.3 灌胃脂肪乳高脂大鼠血糖、FFA和MDA的测定及形态学观察[3,4]大鼠禁食不禁水12h,尾静脉采血,30min内3500r min-1离心20min,分离血清待用。用葡萄糖氧化酶法测空腹血糖;用分光光度法测MDA和FFA。所有操作严格按说明书进行。取肾周脂肪组织作为评价内脏脂肪含量的指标。

1.2.1.4 用毛细血管法测胰岛素敏感性[5] 动物禁食过夜,称重,将鼠固定于鼠笼中,腹腔注射胰岛素0 05U kg-1。注射前及注射后每3min用血糖仪测定血糖,共6次(加注射前共7次)。以时间为横坐标,以血糖的自然对数为纵坐标,直线回归所得回归系数(r)代表直线斜率,r乘以100即KITT值,K值愈小说明受试者对胰岛素愈不敏感。1.2.1.5 正糖钳实验方法[6] 本方法为在原有正糖钳技术的基础上加以修改而成。动物禁食不禁水12h,称重后腹腔注射异戊巴比妥钠25mg kg-1麻醉,仰卧固定,将颈部皮肤剪开,分离双侧颈静脉,结扎远心端,向近心端插入0 08cm硅化胶管,结扎固定。从两侧颈静脉同时输注10%葡萄糖和1IU ml-1胰岛素溶液(恒速),每隔10min尾静脉取血测血糖值,不断调整葡萄糖输注速度使血糖值达稳态。记录稳态下连续60min的葡萄糖输注速率(GIR)。取稳态下6次血糖值的平均值作为稳态血糖,取稳态下6次葡萄糖输注速率(GIR)的平均值作为稳态下的GIR。

者定为2型糖尿病大鼠。结果

与正常对照组比较,灌胃脂肪乳大鼠的体重、饮食、饮水及内脏脂肪重量均明显增高(P<0 05); 灌胃脂肪乳后,大鼠KITT值由正常对照组6 8 1 5下降为4 5 0 9(P<0 05)。正糖钳实验结果表明高脂组大鼠葡萄糖输注速率(GIR)较正常大鼠葡萄糖输注速率明显下降; 四氧嘧啶给药剂量为第一天120mg kg

-1

,第二天100mg kg

-1

时,糖尿

病动物模型成模率可达90%。结论 通过灌胃脂肪乳建立了伴有胰岛素抵抗的Wistar大鼠2型糖尿病的动物模型。关键词:胰岛素抵抗;2型糖尿病;动物模型;四氧嘧啶 目前国内外所进行的2型糖尿病实验研究多采用有糖尿病遗传倾向的近交系纯种动物,如Zuker、Wistar肥胖大鼠、C57BL/6J肥胖(ob/ob)和C57BL/ks糖尿病(ob/ob)小鼠等[1]。但是这些动物的来源少,饲养条件苛刻,并且其特点是遗传因素在发病过程中占主导地位,与临床上的发病特征不完全吻合。有研究者采用高热量喂养大鼠2个月后,注射小剂量的链脲佐菌素后建立2型糖尿病模型[2]。但是,此种方法试验周期过长,亦限制了其广泛的应用。故此建立一种既符合人类2型糖尿病发病特点,而又简单,经济的动物模型仍是当前研究2型糖尿病发病机制及研发抗2型糖尿病药物亟待解决的问题。本研究采用给Wistar大鼠灌胃自制的脂肪乳,辅以腹腔注射四氧嘧啶,在短时间内成功的制备了Wistar大鼠2型糖尿病的动物模型。1 材料与方法1.1 实验材料

收稿日期:2004-03-31,修回日期:2004-05-21

基金项目:黑龙江省科技厅重大项目基金资助项目,No20010101001

-00;黑龙江省教育厅课题资助项目,No10531094;国家自然科学基金资助项目,No30371647

作者简介:艾 静(1968-),女,,博士生,副教授,研究方向:抗糖尿

病新药的开发和研究,E mail:Aijing86@http://www.77cn.com.cn;杨宝峰(1956-),男,教授,博士生导师,Tel:0451 86671354,Fax:0451 86669482,E mail:yangbf@ems.hrb http://www.77cn.com.cn

高糖高脂实验鼠模型的建立

1310 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2004Nov;20(11)

Tab1 Thechangesofbodyweight,diet,drinkandfatweightaroundkidneyofratsloadingwithfatemulsion( x s,n=8)

GroupControlFD

*

BW/g192.8 24.7227.8 22.4

*

**

Diet/g76.3 9.591.5 8.5

**

Drink/ml142.0 24.0257.0 22.0

**

Fat/g10.5 4.618.6 5.8*

P<0 05,P<0 01vsnormalcontrol.BW:bodyweight;FD:fatdiet

1.2.1.6 灌胃脂肪乳大鼠脂肪和胰岛及注射四氧嘧啶后胰岛的形态学检测 大鼠禁食3h,麻醉取肾周脂肪组织和胰腺组织。4%多聚甲醛固定,石蜡包埋、切片,苏木素伊红染色,光镜下观察组织形态学改变。

1.2.2 Wistar大鼠2型糖尿病动物模型的建立

1.2.2.1 实验分组 将灌胃脂肪乳10d的Wistar大鼠80只,腹腔注射四氧嘧啶,按给药方式的不同分为四组,每组20只:A组为一次性腹腔注射四氧嘧啶200mg kg-1;B组为一次腹腔注射四氧嘧啶120mg kg-1;C组为两次给药法,第一次腹腔注射四氧嘧啶120mg kg-1,第二次腹腔注射四氧嘧啶100mg kg

-1

;D组为两次给药法,第一次腹腔

注射四氧嘧啶120mg kg-1,第二次腹腔注射四氧嘧啶80mg kg-1。注射容积为0 2ml kg-1。

1.2.2.2 给药方法及检测 给药方法分为两种:一次给药法和两次给药法。一次给药法的操作程序为:大鼠禁食不禁水12h后腹腔注射四氧嘧啶,15min后腹腔注射胰岛素0 4U,并分别于给四氧嘧啶后2 5h和5h灌胃给25%葡萄糖10ml kg-1。2次给药法的程序为1次给药法的操作程序连续2d进行操作。采用葡萄糖氧化酶法测末次给药后72h的空腹血糖值,以空腹血糖 16 7mmol L-1作为糖尿病大鼠。

1.3 统计分析 应用SPSS11 1统计分析软件对结果进行处理。数据用 x s表示。两组间比较用t test,多组间比较用F检验。率的比较用直接概率法。2 结果

2.1 灌胃脂肪乳Wistar大鼠胰岛素抗性的判定

2.1.1 灌胃脂肪乳Wistar大鼠饮食、饮水及体重的变化 如Tab1所示,与正常对照组相比,给Wistar大鼠灌胃脂肪乳10d后,其体重、饮水、饮食及内脏脂肪重量均明显增加(P<0 05)。

2.1.2 正糖钳和毛细血管法检测灌胃脂肪乳Wistar …… 此处隐藏：9485字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……