纳米四君子汤对急性肝功能衰竭小鼠肠屏障功能的影响

中国微生态学杂志2011年9月第23卷第9期

376X（2011）09-0797-03文章编号：1005-

797

【论

著】

纳米四君子汤对急性肝功能衰竭小鼠肠屏障功能的影响

12232

鞠宝玲，徐艳敏，姚黎军，赵玉佳，海艳洁（1．牡丹江医学院病原生物学教研室，黑龙江省高校肿瘤疾病防治重点实验室，黑龙江牡丹江丹江红旗医院，黑龙江牡丹江157011；3．牡丹江医学院药学系，黑龙江牡丹江157011）

157011；2．牡

【摘要】目的探讨四君子汤常态制剂及纳米制剂对急性肝功能衰竭小鼠肠屏障功能的影响。方法BALB/

GaIN/LPS，c小鼠经腹腔一次性注射D-制备急性肝衰竭致肠屏障损伤模型，观察四君子汤常态制剂及其纳米制剂对肠道正常菌群，肠黏膜分泌型免疫球蛋白A（sIgA）含量，肠组织二胺氧化酶（DAO）活性及肝功能的影响。结果GaIN/LPS后，AST活性显著提高（P＜0．01）；肠道内肠杆菌、小鼠腹腔注射D-血清中ALT、肠球菌数量明显上升（P＜0．01），乳酸杆菌、双歧杆菌数量明显下降（P＜0．05）；肠黏膜sIgA及肠组织DAO含量明显降低（P＜0．01）。P＜0．01）；治疗组间比较四君子治疗组上述指标均得到明显改善，与自然恢复组比较差异有统计学意义（P＜0．05，汤纳米制剂效果要好于常态制剂。结论

急性肝功能衰竭时肠屏障明显受损，四君子汤常态制剂和纳米制剂均具

有一定的保护作用，但纳米制剂效果优于常态制剂，且用药量小。

【关键词】急性肝功能衰竭；肠黏膜屏障；纳米中药

【中图分类号】R285．5

【文献标识码】A

InfluenceofnanoDecoctionofFourMildDrugsontheintestinalbarrierfunctioninmicewithacuteliverfailure

JUBao-ling1，XUYan-min2，YAOLi-jun2，ZHAOYu-jia3，HAIYan-jie2

（1．PathogenicBiologyDepartmentofMudanjiangMedicalCollege，LaboratoryofTumorPreventionandTreatmentofHei-Mudanjiang157011，China；2．HongqiHospitalofMudanjiang，Mudanjiang157011，Chi-longjiangProvinceUniversities，

na；3．PhamacyDepartmentofMudanjiangMedicalCollege，Mudanjiang157011，China）

【Abstract】Objective

ToexploretheinfluenceoftheconventionalandnanopreparationofDecoctionofFourMild

Micemodelofintestinalbarrier

Drug（DFMD）ontheintestinalbarrierfunctionoftheacuteliverfailuremice．Method

GalN）anddisfunctionresultedfromacuteliverfailurewereestablishedbyintraperitonealinjectionofD-galactosamine（D-endotoxin（LPS）andthentheinfluenceoftheconventionalDFMDandnanoDFMDonthelevelofsecretaryIgA（sIgA）ofintestinalmucosa，diamineoxidase（DAO）activityofintestinaltissueandliverfunctionweredetermined．Result

After

intraperitonealinjectionofD-GalN，theactivitiesofALTandASTintheserumofthemodelmiceincreaseddifferently（P＜0．01）；thenumbersofintestinalbacilliandenterococciincreasedsignificantly（P＜0．01）；lacticacidbacteria，bifidobacteriadecreased（P＜0．05）andthelevelofsIgAofintestinalmucosaandDAOofintestinaltissuedecreased（P＜0．01）．Comparedwithnaturalrecoverymice，alltheindiceofthemicetreatedwithconventionalDFMDandnanoDFMDimproved（P＜0．05，P＜0．01）andthoseofnanoDFMDgroupwerebetterthanconventionalgroup．Conclusionwhilethelatterisbetterwithlessdose．

【Keywords】Acuteliverfailure；Intestinalbarrier；NanoChinesemedicine

Intesti-nalbarrierisdamagedobviouslyintheacuteliverfailuremice．BothconventionalandnanoDFMDhaveprotectiveeffect，

肝功能衰竭患者易并发内毒素血症、细菌及真菌肠道内含有大量细菌及毒素，但感染。正常情况下，

被隔离，因此肠道具有重要的屏障功能。任何原因致均可使肠道通透性增加，并发细上述屏障结构损伤，

菌和内毒素易位，从而引发肠源性感染和内毒素血严重时可导致多器官功能衰竭，所以如何防治肠症，

屏障功能障碍已成为当今医学研究的重点和热点

［1］

。四君子汤被证实有多种药理作用［2］，但其纳

GaIN加LPS米制剂的研究未见报道。本课题应用D-联合制备小鼠急性肝衰竭至肠屏障损伤模型，采用球磨法将中药四君子汤制成纳米级，经小鼠体内实验来以观察其对急性肝衰竭小鼠肠屏障损伤的保护作用，期提高药物生物利用度，减少用药量，节省中药资源，并且为临床治疗提供新的思路。11．1

材料与方法材料

【收稿日期】2011-05-07

【基金项目】黑龙江省教育厅资助项目（11531401）

【作者简介】），鞠宝玲（1975-女，硕士，从事中医药微生态学及免疫学

Email：jubaoling2007@yahoo．com．cn研究，

7981．1．11．1．2

动物药物

BALB/c小鼠，体重18～22g，雌雄各常态四君子汤制备，将人参、白术、茯

Sep.2011，Vol.23No.9ChineseJournalofMicroecology，1．2．3

肠道正常菌群检测

无菌收集盲肠内容物

购自哈尔滨医科大学实验动物中心。半，

甘草按质量10︰9︰9︰6配方，加水煎煮苓、

0．5h，用纱布滤出药液，再加水煎煮0．5h，合并2次4℃保存备用。药液，沸水浴浓缩至1g/mL生药量，纳米四君子汤制备采用球磨法，将制备常态四君子汤60℃、24h烘干，的原药剪碎，常规粉碎，加入适量水然后用球磨机纳米化（透射电镜进行纳米作为介质，

级鉴定），浓度为0．2g/mL生药量。1．1．3

试剂

D-GalN）、氨基半乳糖（D-内毒素

（LPS）、二胺氧化酶（DiamineOxidase）、邻联二茴香胺（O～diamisidine）、盐酸戊二胺（GadaverineDi-hydrocdloride）和辣根过氧化物酶（Horseradisepero-zidise）均购自Sigma公司；ALT及AST试剂盒购自南京建成生物公司；sIgA试剂盒购自北京尚柏生物医EC（肠球学技术有限公司；EMB（伊红美兰培养基）、LBS（乳酸杆菌培养基）和BS（双歧杆菌菌培养基）、

培养基）均为实验室自制。1．21．2．1

方法

动物分组及给药方法

BALB/c小鼠48只，

0．1g，置于装有玻璃珠的无菌小瓶内，加0．9mL稀释液，于振荡器上振荡15min，使肠内容物均质化，再

－8－3

用稀释液进行10倍系列稀释至10。选择10、

10－5、10－7稀释度，以连接12号针头的小滴管，自高稀释度向低稀释度在相应的培养基上滴2滴，每滴液体量约为1/47mL，待滴种好的培养基吸干后，将BS及LBS放厌氧箱中，厌氧培养48～72h，将EC及EMB置于37℃温箱中，需氧培养24h。选择菌落适中的稀释度，算出同一稀释度平均菌落数。按照公式：CFU/克标本=x×47×稀释倍数×1/标本重量（g），计算CFU/g标本。将结果以对数形式表示。1．2．4

肠组织DAO含量测定

［3］

距回盲瓣5cm处

取小肠称重，加入3倍体积磷酸盐缓冲液（0．1mol/L，pH7．2），匀浆后10000r/min离心30min，取上清液测定DAO活性。1．2．5

肠黏膜sIgA测定

取靠近回盲部1．5cm的

平铺于滤纸上，纵向剖开，用生理盐水反复冲洗肠段，

再用载玻片轻刮黏膜表面黏液至Eppdef-肠腔表面，

fer管中，加入0．01mol/L的PBS0．5mL，充分混匀，10000r/min离心15min，取上清 …… 此处隐藏：6191字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……