Ang-1,Ang-2和Tie2基因在骨肿瘤组织中的差异表达

第2 9卷第 6期20 0 8年 1 1月

武汉大学学报 (学版 )医M e ia o r a fW u a nv ri dcl u n lo h nU iest J y

Vo . o I 29 N .6NO v,2 8 00

A g1 A g2和 Te因在骨肿 n一， n - i 2基瘤组织中的差异表达李皓桓彭昊方洪松汤洁温志远 武汉大学人民医院骨科湖北武汉 4 06 30 0

摘要目的：讨 An、 g2 T e NA在骨肿瘤组织中的表达及其意义。方法：用逆转录聚合酶链探 1 An一及 i mR 2采

反应法对正常骨组织、软骨瘤、文肉瘤和骨肉瘤组织标本各 6例内 An -、 g2 Ti NA含量进行半定骨尤 gl An一及 e mR 2量检测。结果：性骨肿瘤组织 (文肉瘤、肉瘤 ) An- NA/ g1mR恶尤骨内 g2mR An一 NA比值较正常骨组织和良性肿瘤骨组织比值上调。尤文肉瘤和骨肉瘤中 Te i mRN的表达上调。结论： 2 A恶性骨肿瘤组织内 A g1 A g2及 T e n-, n- i 2

m A表达失衡， RN肿瘤骨组织内可能存有 An/ e g Ti 2的自分泌和旁分泌系统。深入探讨 A g1 An一/ e2在肿 n一/ g2Ti瘤骨组织中的分子生物学机制及其临床病理联系，望使其成为判定骨肿瘤预后的指标，为骨肿瘤分子治疗提有并供靶位点。 关键词血管生成素；肿瘤；骨逆转录聚合酶链反应中图分类号 R 3 .文献标识码 A 781文章编号 1 7—82 2 0 ) 60 8—3 6 18 5 (0 8 0~700

Di f r nta pr s i n o f e e i lEx e s o f Ang 1,An - nd Ti2 m RNA n Bo m o s一 g2 a e i ne Tu r

LIHa h a o u n,P ENG o Ha,F ANG Ho g o g T n s n, ANG J e W EN Zh y a i, iu n

De t fO to e is Remi s i l f Wu a nvri Wu a 3 0 0, h n p .o rh p d c, n nHop t h nU ies y, h n4 0 6 C ia a o tA b ta t sr c

O jc v: o ivsg t teep es no 1 A

n - a dT e R o etmo i u s bet e T et ae h x rsi f i n i o An, g2 n i m NA i b n u rt se 2 n sa d t x l r t l ia i nf a c . Me h d:S mi u n a ie RT P R s u e o a ay e t e e— n o e p o e i ci c lsg i c n e s n i to s e - a t t - C wa s d t n lz h x q v pe s no g 1 r s i fAn -,An - n e o g 2 a d Ti2 mRNA n t s e a v se r m o ma o e se c o d o, i i u s h r e td fo n r lb n,o to h n r ma s

E n’ a cmaa do to ac ma n ) wig Ssro n se sro (=6。Reut: t f g2mR s l Rai o - NA/ g 1mR s o An An - NA sice sd wa ra e ni l n n e in E n’ a c ma a d o t o a c ma wh n c mp r d wi e i n ls n ( o ma n mai a tlso s( wig Ss ro n s e s r o ) g e o a e t b n g e i s n r l h ob n n se c o r ma .Ex r s in o e o e a d o to h nd o ) p e so fTi2 mRNA sup r g lt d i wa -e u a e n Ewi g’ a c ma a d o t o n s ro n s e—

s r o .Co cu in:Th aa c f g 1 a c ma n ls o eb ln e o An -,An - n e g 2 a d Ti2 mRN A e e s wa i t r e n m a i— lv l s d s u b d i l g

n n e in .Th r ye itap s il u o rn n a a rn a h yo g/ e y tm a tlso s e ema xs o sb ea t ci ea dp r c iep t wa fAn s Ti2s se i nb e ma i na tl so .Furhe n e tg to on lg n e i ns t ri v s i a i n ofAngl,Ang 2 a d Ti 2 a her b o d c lsg—一一 n e nd t i i me ia

i

n f a c n b n u r ts u sa d c a i h i c i ia— a h l g c l e a i n wi a e t e p s ii n e i o e t mo is e n l r y t e r l c l t o o ia l t l m k h m o c f n * p r o lsbl r gn tc i ie n o i e mol c a h r p a g t i e p o os i nd c s a d pr v d e ulr t e a y t r e . Ke o ds Ang ge ss yW r o ne i;Bo o a ms;RT— ne Ne pl s PCR

肿瘤克服体积限制而持续生长需要血管生成，

和临床治疗的热点。血管生成素 ( go oe An ip i—

i, g可通过调节内皮细胞的存活而介导血管 n肿瘤血管生成的相关分子机理研究已成为肿瘤研究 t s An )

课题来源家自然科学基金资助项目 (号：0 0 6 7;汉市青年科技晨光计划资助项目(号：0 7 0 3 2 6国编 3 6 0 2 )武编 205715)作者简介：皓桓，男，9 6,医学博士，主任医师，李 1 7一"副主要从事骨肿瘤相关研究

第 6期

李皓桓， . g1 An一等 An一， g2和 Ti基因在骨肿瘤组织中的差异表达 e 2

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生成。其中， g 1酪氨酸激酶受体 Ti An一是 e 2的激活用而促进血管成熟，维持血管稳定； An一而 g2则具有拮抗 An一 g1的功能，血管生成具有双向调节作用。对 我们应用 RT P R技术检测正常骨及骨肿瘤组织中—C An一、 g2及其受体 T e g1 An一 i mRNA的表达，讨 2探其在骨肿瘤发生发展中的作用和意义。

an退 ri,火温度 ( g15 An一 6o An一 6℃, e 4 C, g25 Ti 5 2

剂，它通过协调内皮细胞与环周细胞之间的相互作℃,3 ci 5 5℃) i,2℃ 1mi,环数及引 1a t 5 . - n 1r n 7 a n循 物序列见表 1最后 7, 2℃延伸 1 i。 0r n a表 1引物序列及 P R条件 CTa .1 S qu n e o i es a o iinsf b e e c fprm r nd c nd to orPCR

1材料与方法1 1标本

取材正常骨组织 (伤性截肢/ )骨 .创指、

软骨瘤、尤文肉瘤和骨肉瘤标本各 6例，由武汉大均学人民医院骨科提供。手术中分别获取相应组织，

于液氮中速冻 1 n后置于一7 0mi O℃冰箱保存待测。 1 7扩增产物的电泳分析 1 l C . O R反应液在 P 1 2试剂 T I l用 Ivt gn公司的产品， . Rz采 o nioe r逆 1 5琼脂糖凝胶中电泳分离， B染色后 Ko a . E dk转录采用 F r na公司逆转录试剂盒。P R引物 emets C

D gtl ce c D凝胶成像系统成像。I g to ii i e 1 aS n ma eo l 由上海生工生物工程公司合成，物序列及 P R条件 3 0软件计算 An一 NA/ g1mR引 C . g2mR An一 NA及 Ti2 e见表 1 C。P R试剂盒购自北京天根科技 (北京)限公 mRNA/一 ci有 1a tn mRNA。 3司。P R仪为 T emoHy a x C h r b i P E型 P R仪。 d C1 3组织总 R A提取按 1ml 1 0 mg组织的 . N : 0

1 8统计学处理结果以±s表示，采用单向 .

A VA及 S u e tt验作统计学分析， P< NO t d n—检以比例，入预冷的 T z l加 RIo提取液，玻璃匀浆器中 0 0为差异具有统计学意义。在 .5 充分匀浆，充分混匀的细胞裂解液转移入 1 5ml将 . E P管中 .口力氯仿 ( Io,. 1抽提， TR z l0 2: )剧烈振荡 1 2结果 5S室温下放置 23mi; C,20 0g离心 1 i后— n 4。 1 0 5r n a后，品分层，上层水相于另一 E样取 P管中；异丙加醇 (. 0 5:lTR z1, Io) 4℃, 20 0g离心 1 i, 1 0 0r n可 a 2 1总 RN的电泳检测及定量电泳结果表明， . A

提取的总 R NA呈现清晰的 2 S与 1 S R 8 8 NA条带，

见小胶丸状沉淀附着于管底或侧壁；去上清， 7加 5乙醇 (:1 T z 1,振后，℃, 0 1 RIo)涡 4 7 5 0 g离心 5

两者比例约为 2:,明具有良好的完整性。根据 1表 2 0 n波长的光吸收值 A计算 R 6

m:。 NA的含量。 A。 A。比值均大于 1 8表明纯度符合要求。/ 。 .,2 2 A g1 A g2 Te . n -、 n -、 i2基因在正常骨和肿瘤骨组

mi,上清；淀稍干燥后以适量 ( 0 u) E C处 n去沉 2 1D P理的 H O溶解 R NA。 1 4 RN的电泳及定量 . A分光光度法定量。 1 5 c N合成反应 . D A冰上于 0 5mlP管中加入 . E采用甲醛变性琼脂糖凝

织中的表达人正常骨与肿瘤骨组织中均有 …… 此处隐藏：10294字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……