聚丙烯酰胺凝胶电泳在转基因大豆检测中的应用

万方数据

万方数据

万方数据

※分析检验

食品雨量惮

２燃％正硒ⅣＤ．ＪＤ

Ｊ９９

表３

聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱分析结果

ＴａｂＩｅ３

ＡｎａＩｙｓｉｓ怕ｓｕＩｔｏｆｐ０ＩｙａｃｒｙＩａｍｉｄｅｇｅＩｅＩｅｃｔｒＯｐｈＯ怕ｓｉｓ

泳道条带相对前沿

碱基对

目标ｋ岫

Ｂ髓ｄｓ

ＲｅｌａｄｖｅＦｒｏｎｔ

Ｂ嬲ｅｐａｉ巧长度

ｌ１Ｏ．３４５４３４．３５７４３６２１０．６２１１９４．５９９１９５３１Ｏ．６５０１７９．２１３

１８０４

ｌＯ．６８０１“．４７９

１６５５

１

０．７２３

１４５．３６３

１４６

相同的ＤＮＡ分子量标准，在聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中有不同的迁移率（图６），而且聚丙烯酰胺凝胶中因分辨率高出现一些浅亮度的杂带。

图６

ＤＮＡ

Ｍａｒｋｅｒ聚丙烯酰胺凝胶（上）和琼脂糖凝胶（下）中不同迁移率

比较

Ｆｉｇ．６

ＤＮＡＭａｒｋｅｒｌｓｍＯｖｉｎｇ忸ｔｅｉｎｐＯｌｙａｃｒｙＩａｍｉｄｅａｎｄａｇａｒｏｓｅ

ｇｅｌｅＩｅｃｔｒｏｐｈＯｒｅｓｉｓ

２．３

双引物扩增

以大豆凝集素基因作内置标准检测ＣａＭＶ３５Ｓ启动子

时，阳性样品扩增片段大小与引物设计的目标长度一致，阴性对照和空白对照均无扩增产物出现，表明ＰＣＲ操作过程中无污染（图７、８）。聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱中两条目标产物分离效果好，图谱清晰，便于软件分析和观察者对其进行判断。能提高特异ＤＮＡ片段的定性ＰＣＲ筛选方法的准确性。

泳道：Ｍａｒｋｅｒ为ＤＮＡ分子量标准ＤＬ２０００；１～２为阴性对照；３～９为

ｌ柚ｅｓ：Ｍ妇ｒ，ＤＮＡｃａＭｖ３５ｓ启动子的阳性扩增：１０为空白对照。

ｍｏｌｅｃｕｌ盯ｗｅｉｇｈｔｓｔ柚ｄａｒｄ（ＤＬ２０００）；１～２，ｎｅｇａｔｉＶｅ

ｃｏｎ仃ｏｌ；３～９，ｐｏｓｍＶｅｌｙａｍｐｌ此ａｌｉ∞ｏｆＣａＭＶ３５ｓ；１０，ｂｌａｎｋｃｏｎ仃ｏｌ＿

图７

以大豆凝集素基因作内置标准，ｃａＭＶ３５ｓ启动子ＰｃＲ检测聚丙烯

酰胺凝胶电泳图谱

Ｆｉｇ．７

ＰＯＩｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅＩｅＩｅｃ”ＯｐｈｏｒｅｓＩｓｐａｔｔｅｍｏｆ

ＣａＭＶ３５ＳｐｒｏｍｏｔｅｒＰＣＲａｍｐＩｉｆｉｃａｔｉＯｎｗｉｔｈＩｅｃｔｉｎｐｒｉｍｅｒ

ａｓａ

ｉｎｔｅｍａＩ

ｒｅａｃｔｉＯｎｃＯｎｔｒＯｌ

泳道：Ｍａｒｋｅｒ为ＤＮＡ分子量标准ＤＬ２０００；１～２为阴性对照；３～８为

ＣａＭｖ３５Ｓ启动子的阳性扩增；９为空白对照。

ｌ柚ｅｓ：ＭａｒｋｅＥ，ＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌ盯ｗｅｉｇｈｔｓｔ锄ｄａｒｄ（ＤＬ２０００）；１—２，ｎｅｇａｔｉＶｅ

ｃ∞缸ｏｌ；３ ８，ｐｏｓｉ吐ｖｅｌｙ锄１ｐｌｍｃａ舶ｎ

ｏｆＣａＭＶ３５ｓ；９，ｂｌａｎｋ

ｃｏ咖１．

图８以大豆凝集素基因作内置标准，ｃａＭＶ３５ｓ启动子ＰｃＲ检测琼脂糖

凝胶电泳图谱

Ｆｉｇ．８

Ａｇａｒ∞ｅｇｅＩｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｐａｎｅｍｏｆＣａＭＶ３５Ｓｐｒｏｍｏｔｅｒ

ＰＣＲａｍｐ｜ｍｃａｔｉｏｎｗｎｈｌｅｃ伽ｎｐｒｉｍｅｒ

ａｓ

ａ

ｊｎｔｅｍａｌ怕ａｃｔｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌ

３结论

随着各国转基因标签法的建立和不断完善，建立适合我国的转基因食品国家标准检测方法是刻不容缓的课题。本研究通过分辨率高的聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染技术与琼脂糖凝胶电泳、ＥＢ染色比较，聚丙烯酰胺

凝胶电泳有利于提高定性ＰｃＲ筛选方法的准确性。

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聚丙烯酰胺凝胶电泳在转基因大豆检测中的应用

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：

陈继承， 周瑞宝， CHEN Ji-cheng， ZHOU Rui-bao

河南工业大学,国家大豆改良中心大豆精深加工研究所,河南,郑州,450052食品科学FOOD SCIENCE2005,26(10)1次

参考文献(8条)

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