探讨在高海拔地区应用血液基因组DNA提取试剂盒的最佳条件(2)

来源：网络收集时间：2026-08-29

导读： 1.4.2 DNA浓度、纯度的检测采用紫外线分光光度法[3]. 1.5 统计学方法应用SPSS19.0统计软件进行数据处理。计量资料以s表示，组间比较采用t检验；各构成比的比较采用2检验。以P0.05为差异有统计学意义。 2、结果

　　
　　1.4.2 DNA浓度、纯度的检测采用紫外线分光光度法[3].
　　
　　1.5 统计学方法
　　
　　应用SPSS19.0统计软件进行数据处理。计量资料以±s表示，组间比较采用t检验；各构成比的比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
　　
　　2、结果
　　
　　2.1 DNA不同浓度比例比较
　　
　　实验组109份样品中DNA浓度没有<20ng/μl, 有13份DNA浓度在20-50ng/μl之间， 35份DNA浓度在51-80ng/μl之间， 61份样品DNA浓度>80ng/μl;DNA浓度比例高于对照组见表1.

　　
　　2.2 DNA不同纯度比例比较
　　
　　实验组109份样品中DNA纯度OD260/OD280比值在≥1.7-<1.9之内的有105份，比值小于1.7的有3份，比值≥1.9的有1份， DNA纯度比例高于对照组见表2.

　　
　　3、讨论
　　
　　临床医学疾病研究、分子生物学、遗传学等流行病学的调查研究都离不开高纯度、高分子量的血液基因组（DNA） [1-3].现今， DNA的提取方法较多，也有多种品牌的提取试剂盒可供选择使用。但青藏高原平均海拔较高，如果使用常规化学方法提取DNA因使用有机溶剂量较多不但运输不便而且也会对环境造成污染。最恰当的方法就是利用血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA, 不但操作简便而且有机溶剂的使用量也非常小，并可将获得的DNA直接用于下游实验[4].西藏地区地处高原大气压低于平原地区且干燥低温对DNA的提取有一定的影响，本课题组在平原地区采用天根RelaxGene Blood DNA System血液基因组DNA提取系统试剂盒提取DNA, 按照说明书方法操作，获得的DNA的浓度和纯度均能满足下游实验的需求，但在西藏大学医学院分子生物学实验室（拉萨市平均海拔3600米）采用说明书方法提取DNA时无论是纯度还是浓度均无法满足下游实验要求所以经过多次实验总结提出了天根DNA提取系统在高原地区使用的改良方案：（1）在300微升抗凝血中加入细胞裂解液CL由原来的750μl改为800μl; （2）加入蛋白酶K FG混合液后65℃水浴由原来的10min改为过夜（20h） ; （3）将说明书上的加入200μl TB缓冲液改为100μl, 65℃水浴1h改为过夜（24h） .
　　
　　在高原环境提取DNA的过程中，首先将-80℃保存的抗凝血室温融化后按照改良方案细胞裂解液使用量为血液的3倍，颠倒混匀10次使DNA分离出来[5,6];加入蛋白酶K和FG混合液后水浴20h, 样品溶液透明，推断由于环境因素导致裂解时间延长；加入TB洗脱液后水浴24h后采用紫外分光光度法检测DNA浓度和纯度。根据文献报道DNA纯度判断标准：纯DNA, 其OD260/OD280比值范围应为1.7-1.9;OD260/OD280比值>1.9, 表明有RNA污染；OD260/OD280比值<1.6, 表明有蛋白质等污染[7].实验组109份样品中35份DNA浓度在51-80ng/μl之间， 61份样品DNA浓度>80ng/μl;DNA纯度OD260/OD280比值在≥1.7-<1.9之内的有105份，比值小于1.7的有3份，比值≥1.9的有1份， DNA浓度和纯度比例均高于对照组。
　　
　　采用改良方法在高原地区提取的DNA无论是完整性还是浓度纯度均能保证后续实验研究的需要同时适合临床研究及检测应用。
　　
　　参考文献
　　[1]王秀娟，肖瑞，张传领，等。血液基因组DNA试剂盒提取条件的优化[J].疾病监测与控制杂志， 2015, 12 （9） :855.
　　[2]韩芬霞，杨丽芬。全血DNA提取方法的改进及PCR检测[J].江苏农业科学， 2012, 40 （8） :56.
　　[3]余凯琳，邓正栋，严济。血液基因组DNA提取方法改良[J].南昌大学学报（医学版） , 2014, 54 （10） :9.
　　[4]袁茂勇，郭斌，宋欢，等。DNA定量分析在宫颈病变筛查中应用价值的研究[J].南昌大学学报：医学版， 2011, 51 （6） :68.
　　[5]刘正旺，云美玲，钟江华，等。提取陈旧血液标本中DNA的三种方法比较[J].中国热带医学， 2012, 12 （3） :321.
　　[6]许丽娟，马骁，王洋阳，等。一种快速、经济提取外周凝血基因组DNA方法的建立[J].现代生物医学进展， 2011, 11 （20） :3946.
　　[7]段莹，于卫建。-40℃条件下储存不同时间的全血对提取DNA浓度的影响[J].中国输血杂志， 2011, 24 （11） :973.

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