酵母菌的形态观察及其子囊孢子的观察 - 图文

酵母菌的形态观察及其子囊孢子的观察

一．实验目的

1．了解并掌握酵母菌的形态及出芽方式。

2．学习并掌握区分酵母菌死活细胞的基本方法。

3．了解并掌握酵母菌子囊孢子形态的基本观察方法。

二．实验原理

1．酵母菌

酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已

有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

2．美蓝染液水浸片法（ 鉴定酵母菌细胞的死活）

美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

还原剂（活细胞的新陈代谢） 美蓝（氧化型） 美蓝（还原型） 蓝色 无色 氧化剂（死细胞无还原能力）

3．子囊孢子的观察

子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏 (McClary) 培养基 ( 葡萄糖－醋酸钠培养基 ) 有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。培养后，用类似于芽孢染色的方法即可观察子囊孢子。

三．实验器材

1．菌种 ： 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae) 2. 培养基 ：酵母合成培养基，麦氏琼脂斜面

3. 仪器或其他用具：烧杯，酒精灯，接种环，载玻片，盖玻片，载玻片夹

子，显微镜，双层瓶，0.1%吕氏碱性美蓝，95% 乙醇，孔雀绿染液，番红染液等。

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四．实验步骤

1．美蓝染液水浸片法（ 观察酵母菌的形态及出芽方式，鉴定酵母菌细胞的死活）

（1）滴加一滴0.1%美蓝染液于载玻片中央，无菌操作，用接种环从酿

酒酵母麦氏琼脂斜面培养物上上挑取少量菌体在染液中轻轻蘸一 下，在染液表面形成一层薄薄的菌膜（。注：美蓝染液不宜过多） （2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片

放下使其盖在菌液上。（注：盖玻片不宜平着放下）

（3） 将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母菌形态和出芽情

况，并根据颜色区别死活细胞（活细胞为无色，死细胞为蓝色）。 （4）染色30min后再次观察，注意死活细胞数量的变化。 2．子囊孢子的观察 （1） 制片

取一载玻片，在中央滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作由酿酒酵母麦氏琼脂斜面培养物上挑取适量菌在水滴上，使小液滴呈混浊状，按常规干燥（可在酒精灯上略加热干燥）、固定。 （2） 染色

滴加孔雀绿染液染色2min （3） 脱色

用水洗去多余孔雀绿染液后用 95% 的乙醇脱色30s，水洗。

（4） 复染

用番红复染 30s，水洗，用吸水纸在载玻片边缘处吸干多余水，室温自然干燥。 （5） 镜检

载玻片晾干后用油镜观察（子囊孢子呈绿色、菌体和子囊呈粉红色）。

五．实验结果记录 1、实验数据记录

表一 实验结果记录表

吕氏碱性美蓝浓度 作用时间 每视野活细胞数 每视野死细胞数 3min 很多 很少 0.1% 30min 很多 较多

2、实验观察图

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酿酒酵母出芽生殖

死细胞（蓝色）

活细胞（无色）

酿酒酵母美蓝染色3min局部放大图

酿酒酵母美蓝染色3min 10×40

酿酒酵母美蓝染色30min 10×40

菌体和子囊（粉红色）

子囊孢子（绿色）

酿酒酵母子囊孢子10×100（油镜）

子囊孢子局部放大图

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六．注意事项

1.滴加染液的量要适中，否则用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会

产生大量气泡。

七．思考题

1．根据你的观察结果，吕氏碱性美蓝染液浓度及作用时间与酿酒酵母死、活细胞比例变化是否有关系？试分析原因。

答：吕氏碱性美蓝染液无毒性，在浓度不大的情况下，对酵母菌的死活

细胞的比例几乎无影响。但在浓度过高的情况下，会导致细胞脱水死亡，对酵母菌的死活细胞的比例造成影响。

而作用时间对活、死酵母菌细胞的比例是有影响的（从我的结果看），可能是因为美蓝浓度大，使酵母细胞不断失水，死亡的细胞也越来越多。

2．酿酒酵母除了通过出芽方式进行无性繁殖外，还可以形成子囊孢子进行有性繁殖，你在实验中是否观察到酿酒酵母的子囊孢子？若未观察到，试分析原因（提示：子囊孢子的形成与培养条件有关）。 答：观察到了，见实验观察图。

附：培养基配方

麦氏琼脂培养基 项目 量 葡萄糖 1g KCl 1.8g 酵母浸膏 2.5g 醋酸钠 8.2g 蒸馏水 1000ml pH 自然 在113℃条件下灭菌30min。

酵母菌合成培养基 项目 量 酵母膏 0.5% 葡萄糖 20% 蛋白胨 1% 蒸馏水 1000ml pH 自然 在110℃下灭菌20min。

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