板蓝根生物限度验证方案

板蓝根颗粒微生物限度检查方法验证方案

编码：STP－VP－07010－00

福建省泉州海峡制药有限公司

目 录

1 概述 2 验证目的 3 验证小组 4 验证内容

4.1 酵母菌，霉菌计数方法验证 4.2 控制菌检查方法验证 4.3方法总体评价： 4.4再验证计划

1 概 述

微生物限度检查法是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污染程度的方法。也是评价我公司的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。由于某些供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。 2 目 的

确认在现有微生物检验条件下，按“《中国药典》2005年版一部附录XⅢC微生物限度检查法进行板蓝根颗粒微生物限度检查能得出可靠的检验结果。 3 验证小组

4 验 证 内 容

品 名：板蓝根颗粒，批号： 规 格：

检验依据：《中国药典》2005版一部附录微生物限度检查方法验证试验。

仪 器：架盘天平 、HH-4水浴锅、灭菌锅、电热恒温培养箱、sp型多用生化箱、隔水式电热恒温箱。

培 养 基：营养琼脂培养基、玫瑰红钠培养基、改良马丁培养基、胆盐乳糖发酵培养基、

胆盐乳糖增菌液、MUG培养基、靛基质培养基、麦康凯琼脂培养基。 生产单位：北京三药科技开发公司

pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液 自备 0.9％氯化钠溶液 自备

验证用菌种： （来源：福建省泉州市药品检验所）

枯草杆菌CMCC（B）63501 金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003 大肠埃希菌CMCC（B）44102 白色念珠菌CMCC (F) 98001 黑曲霉CMCC(F)98003。 4.1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证 4.1.1菌液制备：

4.1.1.1取经37℃培养18～24h，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的肉汤培养物1ml+9ml0.9％氯化钠溶液，10倍稀释至10-5 ～10-7，细菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。

4.1.1.2 经25 ℃培养18～24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9 ml0.9％氯化钠溶液10倍稀释至 10-5 ～10-7，菌数约为50-100cfu/ml，做活菌计数备用。

4.1.1.3 取经25 ℃培养一周的黑曲霉斜面培养物，加3～5ml0.9％氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸取出菌液1 ml +9 ml0.9％氯化钠溶液，逐管10倍稀释为10-5 ～10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活菌计数备用。

枯草芽孢杆菌在 级下菌落数为 符合要求。 白色念珠菌在 级下菌落数为 符合要求。 大肠埃希菌在 级下菌落数为 符合要求。

黑曲霉在 级下菌落数为 符合要求。 4.1.2 供试液制备

取样品10g加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用混匀器混匀，作为1：10供试液。

4.1.3 回收率测定：

4.1.3.1试验组:取1：10供试液1m加50～100cfu/ml的实验菌1ml分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基。

4.1.3.2菌液组 分别取50～100CFU/ml各试验菌1ml，注入到培养皿中，即倾倒琼脂培养基，，置规定温度下培养24～72小时，测定每一菌株的试验菌数。

4.1.3.3供试液对照组 取1：10供试液1ml，注入培养皿中，立即倾注琼脂培养基，置规定温度下培养24～72小时，测定供试品本底菌数。 4.1.4可接受标准(限度)

供试品对照组细菌数每克不得过1000个，霉菌和酵母菌数每克不得过100个，并在3次独立的平行试验中，试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数—供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）不低于70%。 4.1.5 验证结果

回收率测定结果

金黄色葡萄球菌回收率 70% 大肠埃希菌回收率 70% 白色念珠菌回收率 70% 黑曲霉回收率 70% 4.1.6评 价：

评价人： 时间： 年 月 日

4.2 控制菌检查方法验证

4.2.1 试验用菌种: 金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003 大肠埃希菌CMCC（B）44102 4.2.2 菌液制备：取经35℃培养18～24h，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、的肉汤培养物1ml+9ml0.9％氯化钠溶液，10倍稀释至10-5 ～10-7，细菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。

4.2.3 供试液制备：取样品10g加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用混匀器混匀，作为1：10供试液。 4.2.4 验证方法

4.2.4.1 试验组:取1：10供试液10ml，及大肠埃希菌液10～100cfu/ml，加入100mlBL增菌液中依照大肠埃希菌检查法进行检查

4.2.4.2 阴性菌对照组：取1:10ml供试液，及10～100cfu/ml金黄色葡萄球菌加入100mlBL增菌液中依照大肠埃希菌检查法进行检查。

4.2.4.3供试品对照组：取1:10ml供试液，加入100mlBL增菌液中依照大肠埃希菌检查法进行检查。

4.2.4.4 阳性对照组：取大肠埃希菌液10～100cfu/ml，加入100mlBL增菌液中依照大肠埃希菌检查法进行检查。

4.2.4.5阴性对照组：取pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液10ml加入100mlBL增菌液中依照大肠埃希菌检查法进行检查。

4.2.5可接受标准（限度）：大肠埃希菌：试验组、阳性对照检出；阴性对照组不得检出。 表3

检验人： 时间： 年 月 日 复核人： 时间： 年 月 日 4.2.6评 价：

评价人： 时间： 年 月 日

4.3 方法总体评价

总评价人： 日期： 4.4再验证计划

若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，应再进行验证。