第21章常用分子生物学技术的原理及其应用

生物化学,常用分子生物学技术的原理及其应用

第21章

常用分子生物学技术的 原理及应用The Principle and Application of Common Used Techniques in Molecular Biology目录

生物化学,常用分子生物学技术的原理及其应用

第一节 分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization and Blotting Technique

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生物化学,常用分子生物学技术的原理及其应用

一、分子杂交与印迹技术的原理 核酸分子杂交

(nucleic acid hybridization)

在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链

分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定

的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex) 。

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复性

RNA

DNA目录

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(一)印迹技术利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子 转移到NC等各种膜上，使之成为固相化分子。 这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹，因 此称之为“blotting”,译为印迹技术。

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(二)探针技术用放射性核素、生物素或荧光染料标记其 末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为 “探针”,探针可以与固定在NC膜上的核苷 酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。

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二、印迹技术的类别及应用(一)DNA印迹 (Southern Blotting)用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。

(二)RNA印迹 (Northern Blotting)用于RNA的定性定量分析。

(三)蛋白质的印迹 (Western Blotting)用于蛋白质定性定量及相互作用研究。目录

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其他：

斑点印迹 (dot blotting)原位杂交 (in situ hybridization)

DNA点阵 (DNA array)DNA芯片技术 (DNA chip)

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三 种 印 迹 技 术 的 比 较

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②

①

③

分子杂交实验

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放 射 自 显 影 照 片

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DNA点阵

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第二节聚合酶链反应Polymerase Chain Reaction

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一、PCR技术的工作原理Template DNA5

5 5

Primer 1 5 Primer 2

Cycle 15 5

5

5

Cycle 25 5 5 5 5 5

5

5 目录

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Cycle 35 5 5 5 5 5 5 5

5 5

5 5

5 5

5 5

25~30 次循环后，模板DNA的含量 可以扩大100万倍以上。目录

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PCR体系基本组成成分

模板DNA 特异性引物

耐热DNA聚合酶 dNTPs

Mg2+

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