芽孢杆菌 芽孢杆菌N株生物学特性及遗传稳定性研究

芽孢杆菌N株生物学特性及遗传稳定性研究

芽孢杆菌N株是我们产酶益生素菌种分离过程中，分离到的一株产酶能力较强的菌株，有希望成为生产益生素的侯选菌株，故对其生物学特性和遗传稳定性进行研究，现报告如下：

1. 菌种的分离：

1.1 培养基：富集培养基用营养肉汤：牛肉膏0.3%、蛋白胨1.0%、食盐0.5%、调PH7.2—7.4、121℃、300min。

1.2 样品处理：健康牛粪10g，加蒸馏水90ml稀释，95℃水浴10min，冷却待分离。

1.3 分离：将处理好的样品1m1，接种于营养肉汤中富集，37℃，24h 培养，然后将培养物移种于营养琼脂平板上划线培养，37℃，24h挑取单个菌落进行纯培养。然后，通过产酶筛选培养基的筛选获得一株产淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶能力较强的菌株、命名为N株。

2. N菌株生物学特性及鉴定

2.1 形态与染色：该菌大小为0.5～1.0×2～3um，繁殖体呈形状，芽孢位于菌体中央，呈椭圆形，不膨大，无荚膜，革兰氏染色阳性。

2.2 培养特性：该菌在普通培养基上能较好生长，需氧培养生长良好，厌氧条件下，基本不生长，在肉汤内培养18h，混浊生长，在普通琼旨平板表面，菌落扁平，周边不整，呈灰白色。

2.3 生化反应：N菌株能发酵葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇、水解淀粉、分解酪朊，还原硝酸盐、利用柠檬酸盐、不产生卵磷脂酶、V—P反应呈阳性、7%NaCl生长。

表1 N菌株生化反应结果

2.4 鉴定：根据形态、染色、培养特性和生化反应，N菌株符合枯草芽孢杆菌的特征，初步定为枯草芽孢杆菌。

3. 遗传稳定性研究：将N菌株在营养肉汤培养基传代，37℃，培养24h传一代，连续转10代，每一代培养物均进行淀粉酶和蛋白酶活测定，并与原始菌株的酶活力做比例，以此作为考察N菌株遗传稳定性的指标。

淀粉酶用细菌α—淀粉酶活力测定方法，蛋白酶用福林-酚法测定，结果见表2。

表2 N菌株遗传稳定性研究

由表2可见N菌株的遗传性非常稳定，每代次培养物之间的淀粉酶和蛋白酶活性，无显著差异。菌种的优良性能够稳定地遗传给下一代是作为益生素生产菌种的首要条件，通过以上试验证明N菌是优良的益生素生产侯选菌。