烟草转化方法及各类培养基配方

表1 烟草转化中使用培养基

Table.1 List of the culture mediums in genetic transformation of tobacco 培养基

Culture medium

继代培养基

Subculture medium

共生培养基（To）

Symbiotic culture medium MS+2.25mg/L6-BA+0.3mg/LNAA

筛选培养基（To）

Sifting medium

壮芽培养基（P8）

Budding selection medium MS+0.1mg/L6-BA+0.01mg/LNAA+400mg/Lcef+100mg/Lkam 生根培养基（1/2MS）

Rooting medium 1/2MS+400mg/Lcef+100mg/Lkam 5.8 ＋＋＋成分 ingredients pH值 pH MS 5.8 5.8 MS+2.25mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+400mg/Lcef+100mg/Lkam 5.8 5.8 注：cef：头孢霉素，kam：卡那霉素； Note: cef: cefotaxime；kan: Kanamycin

MS基础培养基配方：（1L的配方） 1/2 MS基础培养基配方：（1L的配方） MS 大量：50ml MS 大量：25ml

MS 微量：5ml MS 微量：2.5ml

MS 铁盐：5ml MS 铁盐：5ml

MS 有机：5ml MS 有机：5ml

糖 ：30g 糖 ：30g

琼脂 ：7.5g 琼脂 ：7.5g

6-BA母液浓度：0.5mg/ml

NAA母液浓度： 0.5mg/ml

Cef（头孢霉素）母液浓度：200mg/ml

Kam（卡那霉素）母液浓度：100mg/ml

注意：高温会导致Cef（头孢霉素）和Kam（卡那霉素）分解，因此需要在培养基灭菌冷却后再在超净工作台内加入。

LB培养液配方：（1L的配方）

NaCl 10g （10g/L）

胰蛋白胨（TRYPTONE） 10g （10g/L）

酵母提取物（YEAST EXTRACT） 5g （5g/L）

LB固体培养基在液体配方的基础上1L加13g琼脂粉。