大鼠蛛网膜下腔出血后NO_cGMP变化与迟发性脑血管痉挛的关系研究

中西医结合心脑血管病杂志2005年6月第3卷第6期的重要机制。

补肾活血化痰方是在地黄饮子的基础上加减化裁而成,现代药理研究表明方中何首乌、寸云、当归、川芎等对缺血性脑损害的不同病理环节具有良好的防治作用。整方平补肾中阴阳,鼓舞元气,使机体气血津液运行代谢旺盛;同时痰瘀同去,使血脉内外津血互化,精微得以敷布周身。本实验表明,补肾活血方能明显降低大鼠缺血边缘区神经细胞的凋亡数目,显示了良好的抗凋亡作用。特别是低剂量组的结果提示,应用较小剂量的补肾活血化痰中药可产生补而不滞,通而不躁,使精血旺盛,脉络通利的良好效果,对减少脑缺血边缘区神经细胞凋亡,以及阻止迟发性神经元死亡,具有重要意义,值得临床推广应用和进一步深入研究。参考文献:

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genesthatsensitivetoMk-801[J].Stroke,1994,9(25):1855-1859.

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作者简介:张树泉(1962 ),男,毕业于山东中医药大学,副主任医师,现工作于山东省泰安市中医医院(邮编:271000);徐西元,工作于山东省泰安市中医医院。

(收稿日期:2005-03-30)

(本文编辑王雅洁)

大鼠蛛网膜下腔出血后NO-cGMP变化与

迟发性脑血管痉挛的关系研究

陈 旭,李光来,张 波

摘要:目的 探讨蛛网膜下腔出血(SAH)NO-cGMP血管舒张通路受损与迟发性脑血管痉挛之间的关系。方法 采用自体动脉血注入大鼠枕大池的方法制备SAH模型。将18只雄性Wister大鼠随机分为两组,A组为正常组,B组为SAH组,每组9只。利用多普勒观察各组模型的脑动脉血流量,检测大鼠脑动脉组织匀浆内的一氧化氮浓度(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的含量、环磷酸鸟苷(cGMP)的含量。结果 大鼠脑动脉匀浆cGMPB组为(107.55 30.86)pmol/L,A组为(211.00 45)pmol/L,两组相比颅底动脉cGMP含量B组降低(P<0.05)。结论 脑动脉内cGMP含量降低易导致迟发性脑血管痉挛。关键词:蛛网膜下腔出血;脑血管痉挛;环磷酸鸟苷

中图分类号:R743.35 R285.5 文献标识码:A 文章编号:1672-1349(2005)06-0517-02 蛛网膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage,SAH)是常见的脑血管病,占脑卒中的5%~10%,脑血管痉挛是其严重的并发症,发生率高达30%~90%[1],迟发性脑血管痉挛有较高的病死率,还可引起高颅压并降低脑血流量和灌注量,导致严重的局部脑组织缺血或迟发性脑损害,近几年来,随着分子生物学的发展,对其发生机制的研究取得了一定进展。一氧化氮(NO)是内皮衍化舒张因子(EDRFs)的主要成分,SAH产生的代谢物质主要通过平滑肌细胞和内皮细胞来调节脑血管的舒缩功能,NO-cGMP是保持这种平衡的重要通道。1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 选用健康雄性Wistar大鼠(山西医科大学实验动物中心提供)18只,鼠龄(3~4)个月,体重(280~330)g。实验分组:随机分为两组,每组9只,A组为正常对照组,B组为SAH组。

1.2 模型制备 采用枕大池注入自体动脉血法,按360mg/kg腹腔注射10%水合氯醛进行麻醉,枕大池穿刺处脱毛。切开动脉鞘游离股动脉,用1mL注射器抽取动脉血0.2mL~0.3mL,缝合切口,翻转大鼠为俯卧位,头向下倾斜30度,沿枕骨下缘用6号注射针刺入有突破感后见清亮脑脊液流出,注入动脉血,SAH模型制备,制模48h后将对应的两组大鼠行多普,,

[2]

刺破右心耳放血,用250mL生理盐水经左心室灌洗,快速断头,剪开枕顶骨,剥离端脑、间脑、小脑、脑干,见颅底有陈旧性微小血块。取Willis氏环及其相连的动脉放入液氮中,以备测组织匀浆。

1.3 试剂及仪器设备 法国IMMUNOTECH公司提供的cGMP放免试剂盒;南京建成生物研究所NO、NOS测试盒,HDL 500电脑超声仪。

1.4 检测指标及方法

1.4.1 脑血流量的观测 将两组动物按360mg/kg腹腔注射10%水合氯醛进行麻醉,头部剃毛,将HDL 500电脑超声仪的(9~12)MHz探头置于枕大孔处,探测颅内动脉的收缩期血流速度及舒张期血流速度,并计算出阻力指数(RI),RI值高则提示血管阻力高,可反映血管痉挛的指标。

1.4.2 NO、NOS的测定 NO的测定:采用硝酸还原酶法,取大鼠脑动脉的组织匀浆以1000r/min离心5min,取其上清液0.5mL分别加相应的试剂于空白管、标准管、测定管混匀,37 水浴60min,再加相应的试剂离心取上清液,加显色剂用比色法测定各管吸光度值,计算出NO的含量。NOS的测定:取大鼠脑动脉组织匀浆,加适量的盐水稀释,3000r/min,离心10min取上清液,分别测NOS活力及蛋白含量,计算出总NOS

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CHINESEJOURNALOFINTEGRATIVEMEDICINEONCARDIO-/CEREBROVASCULARDISEASE June 2005 Vo1.3 No.6

1.4.3 脑动脉内cGMP测定 将大鼠脑动脉的标本从液氮中取出置入10倍容积的1.07N的盐酸溶液中,经超声粉碎将其变为组织匀浆,经10000r/min离心1min,收集上清液,经萃取后再收集上清液。将含有标本的上清液加入含有琥珀酸粉剂的试管中。吸取50 L琥珀酸化的标本或标准液,150 L的Tris液、125LcGMPTME的混合液加入含有抗体包被的试管中,均匀混合。在2 ~8 的条件下孵育22h,然后进行放射记数。1.5 统计学处理 采用SPSS11.5软件包,结果以均数 标准差( s)表示,选取单因素方差分析进行统计学处理。2 结 果

2.1 脑血流量的改变 HDL 500电脑超声仪的(9~12)MHz探头对颅底的颅外延续到颅内一段动脉进行检查,A组RI为0.562 0.047,B组0.842 0.078,两组相比有统计学意义(P<0.01),即B组血管阻力增高,血流量减少。表明有迟发性脑血管痉挛。

2.2 脑动脉组织匀浆NOS、NO含量 NOS含量A组为(1.57 0.57)U/g,B组为(1.34 0.70)U/g。NO容量A组为(6.44 2.0)mmol/L,B组为(9.37 3.4)mmol/L,两组NO相比有统计学意义(P<0.05),与正常对照组相比SAH组的NO含量增加。

2.3 大鼠脑动脉匀浆cGMP的变化 应用放免试剂盒测的cGMP数值A组(211.00 45.41)pmol/L,B组(107.55 30.86)pmol/L,两组相比有统计学意义(P<0.05),即SAH组与正常组相比颅底动脉cGMP含量降低。3 讨 论

NO从内皮细胞释放后进入邻近的平滑肌细胞,激活可溶性鸟苷酸环化酶(GC),GC产生cGMP,后者激活内质网膜上的钙泵使游离钙进入内质网并使平滑肌舒张。SAH为溶血产物,NO减少使GC失活,作为NO第二信使的cGMP也减少了,继之导致血管收缩。血管内应用NO的底物L-精氨酸可引起血管舒张和脑血流量增加,狗脑池内注入L-精氨酸可减轻基底动脉的痉挛[3]。

本实验应用比色法检测了脑动脉组织匀浆内的NO、NOS,结果表明与正常组相比,SAH组NO含量有所增加。两组NOS的含量没有变化。可能的解释是NOS在软脑膜、静脉成纤维细

[4]

胞表达增加,在脑动脉上没有变化。SAH产生的代谢物质主要通过平滑肌细胞和内皮细胞来调节脑血管的舒缩功能,代谢物质使平滑肌细胞被激活,血管半径变小、阻力增加,致使血管痉挛。而切应力增加可触发内皮舒张因子释放NO,这样才使…… 此处隐藏：4292字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……