神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒说明书

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒说明书

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒说明书

本试剂仅供研究使用标本：体液

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒试验原理：

BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒自备材料

1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒操作注意事项

1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

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7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法

1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。

2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒操作步骤

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

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5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

局限

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.990。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒结果判断与分析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的BFGF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的BFGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml

HELIX-Ⅱ人Ⅱ型胶原螺旋肽规格：48T/96T

Col Ⅱ人Ⅱ型胶原规格：48T/96T

28S rRNP 人28S抗核糖体抗体规格：48T/96T

26S PSM 人26S蛋白酶体规格：48T/96T

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OH 人25羟基维生素D3 规格：48T/96T

2,3-DPG 人2,3-二磷酸甘油酸规格：48T/96T

2,3-dinor-TXB2 人2,3Dinor血栓烷B2 规格：48T/96T

PⅠNP 人Ⅰ型原胶原N端前肽规格：48T/96T

PⅠCP 人Ⅰ型前胶原羧基端肽规格：48T/96T

CⅠCP 人Ⅰ型前胶原C末端肽规格：48T/96T

ⅠCTP 人Ⅰ型胶原交联羧基末端肽规格：48T/96T

NTX 人Ⅰ型胶原N末端肽规格：48T/96T

CTX-Ⅰ人Ⅰ型胶原C端肽规格：48T/96T

Col Ⅰ人Ⅰ型胶原规格：48T/96T

17-KS 人17-酮类固醇规格：48T/96T

17-OHP 人17羟孕酮规格：48T/96T

17-OHCS 人17羟皮质类固醇规格：48T/96T

16-α OHE-1 人16α羟基雌酮1 规格：48T/96T 15-LO/LOX 人15脂加氧酶规格：48T/96T

12-HETE 人12羟二十烷四烯酸规格：48T/96T

11-DH-TXB2 人11去氢血栓烷B2 规格：48T/96T 1,3-βD glucosidase 人1,3-βD葡葡糖苷酶规格：48T/96T OH 人1,25二羟基维生素D3 规格：48T/96T

HIS 犬组胺规格：48T/96T

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