毛细管电泳紫外检测法测定莲须中的槲皮素木犀草素山萘酚

毛细管电泳紫外检测法测定莲须中的槲皮素木犀草素山萘酚

第35卷

分析化学(FENXIHUAXUE)　研究简报第8期

2007

年8月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1187～1190

毛细管电泳紫外检测法测定

莲须中的槲皮素、木犀草素、山萘酚、异槲皮甙

荆瑞俊

1

31,2

　姜小莹

1,2

　侯书荣　李向军　222

(河南科技学院化学化工学院,新乡453003)　　2(,北京100049)

摘　要　采用毛细管区带电泳紫外检测法(CZE2UV)、、异槲皮甙4种有效成分。研究了缓冲溶液的离子浓度、pH,得到了最佳分离实验条件。在离子浓度为40mmol/LNa2B4O7(.0),16kV,波长为254nm时,槲皮素、木犀草素、山萘酚、10in,其检出限分别为5.0、6.7、4.5和6.0mg/L。。关键词,,山萘酚,异槲皮甙,毛细管电泳

1　引　言

高效毛细管电泳以高压直流电场为驱动力,以毛细管作分离通道,依据样品之间电离度和分配行为

上的差异而实现分离,具有高效、快速、样品用量少等优点,与传统的高效液相色谱分析法相比,它进样

[1,2]

体积小(1～50μL)、用时短,而且不会污染柱。在中药有效成分分析中已得到了广泛应用。莲须为睡莲科植物莲的干燥雄蕊,用于治疗遗精滑精、带下和尿频。莲须、荷叶、莲子心和莲子均为莲的不同药用部位。化学成分和含量测定方法集中在莲子上,对莲须中的有效成分分析还不多见,孟宪[3][4]

生等使用高效液相色谱分析了莲须中的槲皮素和山萘酚。王月伶等采用离子液体修饰毛细管胶束电动色谱法测定了槲皮素和异槲皮甙。本实验采用毛细管电泳紫外检测同时分离测定了莲须中的槲皮素、木犀草素、异槲皮甙和山萘酚。在优化的实验条件下,上述4种组分能被完全分离测定。本实验方法简便、快速,为莲须的质量分析提供了新的指标性成分的分析方法。

2　实验部分

2.1　仪器与试剂

CL1020高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司、中科院研究生院应化所),检测波长范围

为190～700nm;未涂层弹性石英毛细管柱(50μmi.d,总长50cm,有效长度40cm,(河北永年光导纤维厂),pHS23B酸度计(上海雷磁仪器厂),H6605型超声清洗机(无锡电子设备厂)。

标准对照品:槲皮素、木犀草素、异槲皮甙、山萘酚(Sigma公司)、莲须(北京同仁堂药店),其它试剂均为分析纯。实验用水为三次蒸馏水。

1.0g/L标准溶液的制备:准确称取槲皮素、木犀草素、异槲皮甙和山萘酚对照品,分别用乙醇溶解,以0.45μm醋酸纤维滤膜过滤后备用。2.2　实验方法

以40mmol/LNa2B407(NaOH调节至pH9.0)缓冲溶液为电泳介质。未涂层弹性石英毛细管(50μmi.d,总长50cm,有效长度为40cm)。所有溶液使用前均用0.45μm滤膜过滤。毛细管使用前用0.1mol/LNaOH、水、电泳缓冲溶液各冲洗10min,然后在每次电泳后分别用0.1mol/LNaOH、水、缓冲溶液冲洗5、5和2min,可保持迁移时间和峰高良好的重现性,然后进行分离测定。采用重力进样,进样高度10cm,进样时间6s,分离电压16kV,检测波长254nm。所有实验均在室温下进行。

　2006209220收稿;2007203207接受

本文系国家自然科学基金(No.20175025,29875027)、国家自然科学基金分析化学重点基金(No.20235010)资助项目3E2mail:jrjhn1025@http://doc.guandang.net

毛细管电泳紫外检测法测定莲须中的槲皮素木犀草素山萘酚

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分析化学第35

卷

2.3　样品溶液的制备

莲须样品粉碎,过筛(20μm)后,准确称取4.6101g,加人50mL乙醇,水浴加热回流4h,趁热过滤,滤液蒸发至15mL,然后再稀释定容至50mL,样品溶液以0.45μm滤膜过滤后备用。

3　结果与讨论

3.1　缓冲溶液pH及其浓度的影响

本方法分别以Na2B4O7溶液、Na2HPO42NaH2PO4混合溶液和2HP4、NaH2PO42Na2B4O7混合溶液为缓冲溶液进行电泳分析实验,,以B47)、果最好。缓冲溶液的pH,(ζ电渗流(FOF)和分析物的带电情况,延长,但增大程度不同,　　上述4峰顺序,4所示。其迁移时间随pH的增大而延长4种物质的出峰顺序也有变化。随pH值的增大4种物质之间的分离度增大,而电流也随着增大,本实验选择缓冲溶液为pH9.0。

　　图2b是缓冲溶液浓度对分析物迁移时间的影响,随着缓冲溶液浓度的增加,4种分析物的迁移时间延长,分离度提高。考虑到增加缓冲溶液浓度会增加焦耳热效应,造成基线噪　图1　pH值对4种物质迁移时间和出峰顺序的电泳图

音增加,影响分离度,本实验选择40mmol/LFig.1　EffectofbufferpHonthemigrationtimeandorderof

apexNa2B4O7缓冲溶液。3.2　工作电压的影响

1.异槲皮甙(isoquercitrin);2.山萘酚(kaempferol);3.木犀草素(luteolin);4.槲皮素(quercetin)。

[5～7]

,随着pH值的增大,迁移时间

图3是工作电压对迁移时间的影响。实

验中得出各组分的迁移率随分离电压的降低而减小,迁移时间延长,分离度提高,但谱带展宽且峰高降低。随着电压的升高,电流升高,基线噪声增加,使分离度降低。综合考虑分离度、焦耳热效应和分离时间等因素,本实验选择工作电压为16kV

。

　图2　缓冲溶液的酸度(a)和缓冲溶液浓度(b)对迁移时间的影响

Fig.2　Effectofbufferacidity(a)andbufferconcentration(b)onmigrationtimeoftheanalytes

1.异槲皮甙(isoquercitrin);2.山萘酚(kaempferol);3.木犀草素(luteolin);4.槲皮素(quercetin)。

3.3　标准曲线、重现性及检出限

在上述优化实验条件下,4种物质在10min内能够良好分离,标准混合物的分离电泳图谱如图4所

示。对一系列异槲皮甙、山萘酚、木犀草素、槲皮素的标准混合样品进行分析测定,测定其峰面积与浓度

毛细管电泳紫外检测法测定莲须中的槲皮素木犀草素山萘酚

第8期荆瑞俊等:毛细管电泳紫外检测法测定莲须中的槲皮素、木犀草素、山萘酚、异槲皮甙

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的关系,所得异槲皮甙、山萘酚、木犀草素、槲皮素的线性范围、线性方程、相关系数及检出限(S/N=3)

如表1所示

。

　图3　电压对迁移时间的影响

Fig.3　Effectofmeana2lytes

1.is);山萘酚(kaempferol);3.木犀草

4标准溶液(a)与样品溶液(b)的毛细管电泳图谱

Fig.4　Capillaryelectropherogramsofstandardmixture(a)andsamplesulution(b)

1.异槲皮甙(isoquercitrin);2.山萘酚(kaempferol);3.木犀草

素(luteolin);(quercetin)。素(luteolin);4.槲皮素(quercetin)。

表1　异槲皮甙、山萘酚、木犀草素、槲皮素的线性范围、线性方程、相关系数

Table1　linearconcentration,linearequation,relativecoefficientanddetectionlimitofisoquercitrin,kaempferol,luteolinandquercetin

组分

Component

线性范围

Linearrange(mg/L)20～100018～1000200～100020～1000

线性方程

Linearequation

Y=41558X+999.85Y=53346X+671.54Y=107964X-254.50Y=72715X+919.56

相关系数

Correlationcoefficient(r)0.99820.99910.99920.9974

检出限

Detectionlimits

(mg/L)

0.00500.00670.00450.0060

异槲皮甙Isoquercitrin山萘酚Kaempferol木犀草素Luteolin槲皮素Quercetin

　　通过连续进样含有4种物质的0.200g/L的标准溶液,连续 …… 此处隐藏：5080字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……