2015-HDN实验设计实验报告

临床输血与检验创新性实验设计

二级学院：检验学院

实验名称

教研室：临床检验学

母婴Rh血型不合的新生儿溶血病检查的实验设计

专业：医学检验课题组主要成员

杨晨庄海青王雷刘晓阳陈大越邓铮

一、实验设计

(一)标本、试剂及器材1.标本:患儿不抗凝脐血2.试剂及器材[2]:(1)患儿血清学检查：

姓名吴文钦

层次：本科

性别男女男女男男男

年级：2012

学号12203070217122030702141220307022612203070212122030702251220307020112203070224

小班：7班

备注

[1]

、产妇肘静脉血液

1)直接抗人球蛋白试验:试剂:①抗人球蛋白血清(广谱)。

②抗D致敏的5%Rh(D)阳性红细胞盐水悬液(供阳性对照用)。③正常人5%D阳性红细胞悬液（未致敏，供阴性对照用）。④生理盐水。

器材:①试管、记号笔、蜡笔、试管架。

②滴管、乳胶吸头。③吸管、吸耳球。④载玻片。⑤离心机。⑥显微镜。⑦滤纸。2）抗体释放试验：试剂：①受检者血清。

②相应抗原的红细胞（抗凝血）。③乙醚(分析试剂)。④生理盐水。

器材：①小试管、试管架、记号笔、蜡笔。

②尖滴管、乳胶吸头。③37℃水浴箱。④载玻片。⑤离心机。⑥显微镜。

3）游离抗体试验：

试剂：①抗人球蛋白血清（广谱）。

②受检血清。

③5%同型抗原的红细胞悬液。④不完全抗D血清。⑤正常人AB型血清。⑥5%D阳性红细胞悬液。⑦生理盐水。

器材：①试管、试管架、记号笔、蜡笔。

②尖滴管、乳胶吸头。③37℃水浴箱。④载玻片。⑤离心机。⑥显微镜。⑦滤纸。

(2)产妇血清学检查：试剂：①抗人球蛋白血清。

②产妇血清。③患儿红细胞④配组红细胞⑤生理盐水

器材：①试管、记号笔、蜡笔、试管架。

②尖滴管、乳胶吸头。③37℃水浴箱。④载玻片。⑤离心机。⑥显微镜。

(二)主要实验

[2]

[4]

患儿血清学检查：1.直接抗人球蛋白试验(1)原理：

利用抗人球蛋白血清可与体内已被不完全抗体或补体致敏红细胞产生凝集反应，可检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏。用最适稀释度的抗人球蛋白血清与充分洗涤后的受检红细胞盐水悬液混合，如有红细胞凝集为阳性，表明红细胞已被致敏。(2)操作：

1)取受检者红细胞，以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，配成5%红细胞盐水悬液。

2)取上述5%受检者红细胞盐水悬液1滴，移入一小试管内，加抗人球蛋白血清1滴，混匀。

3)阳性对照：用不完全抗D血清致敏的5%D阳性红细胞悬液1滴，加抗人球蛋白血清1滴，混匀。

4)阴性对照：正常人5%D阳性红细胞悬液1滴加抗人球蛋白血清1滴，混匀。5)受检管以及阳性、阴性对照管同时以1000r/min离心1min，轻轻侧动，观察结果。6)结果判读：如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，则受检红细胞凝集者为直接抗人球蛋白试验阳性，不凝集者为阴性。

1)标本采取后应立即进行试验，延迟或中途停止试验可使抗体从细胞上丢失。2)抗人球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度,否则,可产生前带或后带现象而误为阴性结果。

3)也有将浓的抗人球蛋白血请在白资板上做倍量系列稀释，再各加受检者10%洗涤红细胞悬液滴，不断转动瓷板，肉眼观察凝集反应。凡出现凝集的最高稀释倍数的倒数即为直接抗人球蛋白试验效价。

4)受检红细胞一定要用盐水洗涤3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防假阴性结果。

5)最好对阴性结果进行核实，即在该试管中加1滴IgG致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗人球蛋白血清确未被消耗。2.抗体释放试验(1)原理：

红细胞上的抗原与血清中抗体在适合条件下发生凝集或致敏，这种结合是可逆的。如改变某些物理条件，抗体又可从结合的细胞上放散，再以相应的红细胞鉴定放散液内抗体的种类并测定其强度，用以判定原来红细胞上抗原的型别。这种方法常用于ABO亚型的鉴定、全凝集或多凝集红细胞的定型、类B的鉴定以及新生儿溶血病的诊断等。放散试验的方法很多，ABO血型IgM抗体以热放散法为常用。Rh血型IgG抗体以乙醚放散法为常用。(2)操作：

1)取具有相应抗原的抗凝血，离心后吸去血浆，加大量生理盐水，洗涤1次，离心，取压积红细胞备用；

2)受检者血清5ml，加压积红细胞lml，混匀后放在适当的温度中1小时，在此期间要摇匀1-2次；

3)取出后离心，将上清液吸出放到另一管中，鉴定上清液的抗体。4)将红细胞用盐水洗涤3次，离心压实红细胞；

5)取1体积压积红细胞加1体积生理盐水，2体积乙醚，颠倒摇匀10分钟，然后以3000r/min离心5min；

其色深红；

7)用清洁的吸管吸出放散液。若有浑浊，再离心一次；8)将放散液放置37℃水浴中30分钟，除尽乙醚，然后鉴定抗体

9)结果判定：以Rh血型抗体抗D为例，放散液若发生凝集，证明该放散液中含IgG抗D抗体，反之，则不含有IgG抗D抗体。

1)为了使放散液内含有最多的抗体,吸收血清量应加大。

2)放散时,应严格注意温度和时间。温度过高红细胞易榕解;温度过低，抗体从红细胞上放散不完全。

3)直接抗人球蛋白试验阳性的红细胞，如新生儿榕血病患儿或自身免疫性溶血性贫血患者，经洗涤后即可作抗体放散试验。

4)放散液中抗体易变性，故应立刻进行鉴定。若需保存,应将抗体放散于选定的AB型血清或牛白蛋白液中。3.游离抗体试验(1)原理：

本试验是一种检测血清中不完全抗体或补体的方法。即用已知抗原的红细胞测定受检血清中相应的不完全抗体;或用已知抗体的抗血清测定受检红细胞上相应的抗原。常用于血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验以及其他特殊研究。(2)操作：

1)取试管3支，标明受检管、阳性对照及阴性对照。2)取受检血清2滴，加1滴5%同型抗原红细胞悬液。

3)阳性对照:取不完全抗D血清2滴，加1滴5%阳性红细胞悬液。4)阴性对照:取正常人AB型血清2滴，加1滴5%D阳性红细胞悬液。

5)混匀，置37℃水浴中1h，用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后，将上清夜除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去。每管再各加生理盐水1滴，混匀。

6)每管各加适当浓度抗人球蛋白血清1滴，混匀，1000r/min离心1min，观察结果。7)结果判定：阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集；受检管出现凝集者为阳性，表示受检者血清中有不完全抗体。如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因，重做。8)效价滴定：如受检血清中检出有不完全抗体，可将受检血清以盐水作倍量稀释后，按上法进行测定。(3)注意事项：

1)经研究发现:血清与相应红细胞在37℃水浴中致敏的时间，如致敏1h，75%的抗体吸附于红细胞上;如致敏时间延长达2h，则抗体吸附达95%;如以低离子强度盐水溶液(LISS)代替生理盐水配制5%红细胞悬液，则致敏时间可缩短。大多数抗体经致敏15-30min即可。

2)红细胞洗涤应迅速，经开始洗涤，就不应中途停止。洗涤用盐水要足量，并用力冲人管底，使压紧于管底的红细胞松解。切勿用于指堵住管口，颠倒混匀，以防污染来自皮肤的蛋白。据研究，其量即使只有1:4000稀释，即可中和抗人球蛋白血清1滴。

3)离心速度和时间十分重要，应按规定进行。原则上应以最小的离心力和最短的离心时间能使阳性对照管出现阳性反应为宜。

4)如果检查的抗体为补体依赖型抗体，则必须加入 …… 此处隐藏：3437字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……