实验六__微生物生理生化反应观察

实验六 微生物生理生化反应观察

一、实验目的

初步了解微生物生化鉴定与分类的原理 与方法；掌握淀粉水解实验、明胶水解 实验、尿素水解实验、糖发酵实验的原 理和方法。

二、实验原理1.淀粉酶能水解淀粉为小分子的糊精、双 糖和单糖，而淀粉遇碘液会产生蓝色， 因此能产淀粉酶的微生物在淀粉培养基 上培养用碘处理会产生无色区域，据此 可分辨微生物能否产生淀粉酶。

2.明胶是由胶原蛋白水解产生的蛋白质， 在25℃以下可维持凝胶状态，以固体形 式存在，而在25℃以上明胶会液化。如 果接种的微生物能够产生明胶酶就可以 使明胶生化管在25 ℃以下发生液化，据 此性质可以鉴别产明胶酶的微生物。

3. 尿素酶能够使尿素分解释放出氨气和二氧化碳，氨溶于水使加有酚红酸碱指示

剂的营养琼脂由中性变成碱性，从而产生颜色变化(由黄色变成深粉红色)。

通过生化管的颜色变化就可以判断接种的培养基是否产生尿素酶。

4、有些微生物能够分解葡萄糖或乳糖产生有机酸(乳酸、醋酸、丙酸)使生化管

的PH值降低，从而使含酸碱指示剂溴甲酚紫的营养琼脂由紫色变成黄色，通过

生化管的颜色变化可以判断是否能产生相应的糖水解酶类。

三、实验步骤(二人一组)1.淀粉水解实验：每人接种二支淀粉生化 管(分别接种大肠杆菌和枯草芽孢杆 菌),37℃培养2d,加卢革氏碘液观察 和记录每管颜色变化，得出结论。

2.明胶水解实验：每人接种二支明胶生化管(分别接种大肠杆菌和金黄色葡萄球

菌),20℃培养2天，从20℃取出即观察和记录各管的明胶水解情况，得出结论。

3.尿素水解实验：每人接种两支尿素生化 管(分别接种变形杆菌和金黄色葡萄球 菌),37℃培养2天，观察和记录每管培 养前后颜色变化，得出结论。

4、葡萄糖发酵试验：每人接种二支葡萄糖 生化管(一支接种大肠杆菌、一支接种 变形杆菌),37℃培养2天，观察和记录 每管培养前后颜色变化，得出结论。

5、乳糖发酵试验：每人接种二支乳糖生化 管(一支接种大肠杆菌、一支接种变形 杆菌),37℃培养2天，观察和记录每管 培养前后颜色变化，得出结论。

四、实验注意事项

淀粉水解实验，在观察时需要加卢革氏 碘液以便观察淀粉的水解情况；接种均在无菌条件下操作，接种完毕以 后用灭菌好的棉花塞住管口防止污染； 生化管用砂轮切割玻璃后接种。

思考题

接种后的明胶试管可以在37 ℃下培养， 在培养后你必须做什么才能证明水解的 存在?对你的实验现象进行分析

示 教肠道致病菌的分离鉴定

分

离鉴定步骤1、分离培养划线 分离 粪便标本 S-S平板 培养

大，红色，非致病性菌 菌落

小，无色半透明，为可 疑菌落

2、初步鉴定选取可疑菌落转种 半固体，双糖铁 培养基 培养 观察培养基变化

3、进一步鉴定 对初步鉴定的菌种进一步做生化鉴定 4、血清学鉴定 肠道杆菌型别较多，常需血清学方法进行确 证 5、药敏试验 为针对性治疗提供依据