李金明—临床基因扩增检验的质量保证(讲义版)

2013年浙江省临检中心PCR培训班 培训资料

临床基因扩增检验的质量保证李金明国家卫生计生委(原卫生部)临床检验中心 Tel.010-58115061 Email: jmli63hn@http://doc.guandang.net 2013.11.20.杭州

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临床分子诊断发展历程：几个里程碑1953年:DNA双股螺旋的发现 1963年:放射免疫测定技术、核酸测序方法 1972~1973年:重组DNA技术 1983年:PCR测定技术 1991-1993年:实时荧光PCR技术和芯片技术 2003年：人类基因组计划基本完成。纳米和量子标记技术？ 2011年-新一代测序技术

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分子诊断的概念采用分子生物学方法(基因扩增、测序、杂交、蛋白质组分析和代谢组学等)检测患者体内特定遗传物质的结构或表达水平的变化而做出的诊断。分子诊断的材料包括DNA、RNA、蛋白质和小分子。

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分子诊断是整个检验医学领域内发展最快、最有活力的，在疾病的诊断和治疗中往往有决定性作用！

诊断医学

70%以上信息来自实验室

预测

诊断

监测

预后

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目前国内的临床分子诊断现状绝大部分用于病原体核酸检测较少部分用于遗传病的产前诊断个体化用药的分子诊断正在兴起

基本上是使用基因扩增方法

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个体化医学(Personalized Medicine)Personalized medicine这个名词最早由Gibson提出，其意。现代意义义是家庭医生独立行医的意思的个体化医学概念于1999年由Langreth和Waldholz在《Oncologist》杂志上首次提出，其意义是根据病人的遗传学背景，结合生物信息学和高端成像技术进行诊断，从而合理选择药物进行治疗。广义概念：医生使用体外试验、影像技术以及症候学等诊断工具，以确定某一特定疾病状况，然后采用合适的治疗方式和药物对患者进行治疗。狭义概念：是指通过分子诊断检测个体基因及表达上的差异，然后进行针对性的药物治疗。[Gibson WM. Can Fam physician, 1971, 17: 29-88.][Langreth R, Waldholz M. Oncologist, 1999, 4: 426-427][Ferrara J. Mcgill J Med,2007, 10(1): 59-61]

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个体化医学检测主要是指利用个体基因型或基因表达谱信息在分子水平上做出临床诊断，从而增加诊断的准确性并根据患者的遗传特征选择合适的治疗方法。Spang R. Biosilico, 2003, 1, 64-68.

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“个体化医学”全面定义个体化医学是根据每个病人的个体特征制定相应的治疗策略的医学，但并不意味着对每个病人都准备一套药物或设立一套医疗设备，而是根据病人对特定疾病的易感性以及对特定治疗的应答程度进行分类治疗，使得预防或治疗性的干预措施能集中于确定会受益的人群，从而为那些不会受益的人群节省医疗开支并减少药物的副反应，该定义强调了人是个体化医学的立足之本。2008年，美国总统科学与技术顾问委员会(the President’s Council of Advisors on Science an

d Technology, PCAST)提出了一个全面的定义

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基因多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)遗传和变异是生命的特征。且多样而复杂，导致生物界的多种多样性，生物体所具有的遗传性状称为表型或表现型(phenotype )。生物体所具有的特异基因成分称为基因型(genotype)。表型是基因型与环境因素相互作用的结果。遗传物质是相对稳定的，但是又是可变的，遗传物质的变化以及由其所引起表型的改变，称为突变(mutation )。遗传物质突变包括染色体畸变和基因突变。基因突变是染色体中某一点上发生化学改变，所以又称为点突变(pointmutation)。单核苷酸多态性(SNP)指的是由单个核苷酸—A,T,C或G的改变而引起的 DNA序列的改变，从而造成的不同物种间或人体内染色体基因组的多样性。根据SNP在基因中的位置，可以分为基因编码区，基因非编码区，或者基因的间隔区(基因之间的区域)。由于基因序列的简并性，含有编码序列的 SNP不一定会改变蛋白的氨基酸序列。编码区的SNP有两种类型，即同义和非同义。同义SNP并不影响蛋白质序列，而非同义SNP则会改变蛋白质的氨基酸序列。

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SNP与个体化医学检测如果编码药物代谢酶(如细胞色素P450)的基因(如CYP2C9等)发生非同义突变，造成酶活性的差异，则机体对相应药物的代谢能力就会出现不同，进而决定了特定个体的能否使用特定药物及其用量。

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基因多态性与药物治疗基因CYP2C19 CYP2C9 CYP2D6

药

物

伏立康唑、奥美拉唑,泮托拉唑、艾美拉唑、雷贝拉唑、地西泮、那非那韦塞来考昔、华法林阿托西汀、文拉法辛、利哌利酮、塞托溴胺吸入、他莫昔芬、噻吗洛尔、氟西汀、奥氮平、西维美林、托特罗定、特比萘芬、;曲马多、氯氮平、阿立哌唑、美托洛尔、普萘洛尔、卡维地洛、普罗帕酮、硫利达嗪、普罗替林、可待因卡培他滨、氟尿嘧啶乳膏和外用液拉布立酶、氨苯砜、伯氨喹、氯喹利福平、异烟肼、吡嗪酰胺硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤、6-巯基嘌呤依立替康(Irinotecan)华法林

DPYD G6PD NAT TPMT UGT1A1(*28 ) VKORC1

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“信号传导通路”(Signal Transduction Pathway)通常是由分泌释放信息物质的特定细胞、信息物质(包含细胞间与细胞内的信息物质和运载体、运输路径等)以及靶细胞(包含特异受体等)等构成。通常包括以下步骤：特定的细胞释放信息物质(总部传令通信兵)→信息物质经扩散或血循环到达靶细胞(信息到达目的地)→与靶细胞的受体(跨膜分子)特异性结合(传达室)→受体结构变化，对信号进行转换并启动细胞内信使系统(内部通信兵系列)→靶细胞产生生物学效应

(增殖、侵袭、转移、凋亡耐受等)。通过这一系列的过程，生物体对外界刺激作出反应。换个通俗说法，人体就好比是一支部队，班是最小的作战单元。要想让这支部队统一行动，必须保证信息通畅。于是指挥部为每个班配备了一部电话机和一名通信兵，司令员通过电话分派任务。万一电话线被切断，或者通信兵叛变投敌，那肯定会出乱子。这根电话线和这些通信兵组成了这支部队的信号传导通路。

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非小细胞肺癌(NSCLC)

Rebecca S. Heist,Jeffrey A. Engelman . Cancer cell 2012

针对EGFR所开发的分子靶向药物主要分两类: 1)小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI),如吉非替尼(Gefitinib,也称为易瑞沙/Iressa,阿斯利康)和厄罗替尼(Erlotinib,也称为特罗凯/Tarceva,罗氏制药),抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活性； 2)单克隆抗体(mAb),如西妥昔(Cetuximab,也称为爱必妥/Erbitux,默克公司)和帕尼单抗(Panitumumab,也称为维克替比/Vectibix,安进公司),与EGFR胞外区结合，阻断依赖于配体的EGFR活化。1.Pao W et al. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 2004;101:13306-11. 2.Lynch TJ et al. N.Engl.J.Med. 2004;350:2129-39.

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KRAS基因定位于人 12p12.1,其mRN …… 此处隐藏：2729字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……