多糖的提取和分析方法

多糖测定方法

第22卷第3期化工时刊Vol.22,No.3

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2008年3月ChemicalIndustryTimesMar.3.2008

多糖的提取和分析方法

刘　婷　周光明

(西南大学化学化工学院,重庆400715)

摘　要　对近年来多糖的最新提取和分析方法,按不同方面分析的分类对多糖的一些分析检测技术进行了综述,并对各种检测技术从方法、操作等方面进行了优缺点比较,为多糖分析的进一步发展研究提供参考。关键词　多糖　提取　分析方法

ExtractionandAnalyticalmethodofPolysaccharides

LiuTing　ZhouGuangming3

(SchoolofChemistryandChemicalEngineering,SouthwestUniversity,Chongqing400715)

Abstract　Thenewestextractionandanalyticalmethodofin,andsome

analysisanddeterminationtechnologyforpolysaccharidesweretodifferentpartsofanalysis1Moreover,accordingtotheofdeterminationtechnologythecomparisonofthethereferencesforthefurtherdevelopmentsandre2searchmentsof1The44referenceswereadopted1

Keywords　extraction　analyticalmethod

　　糖类是自然界中存在最多的有机化合物,也是重

要的生物高分子化合物和信息物质。多糖(polysac2charides,PS)分布广泛,在高等植物,细菌,真菌,藻类

提取率的同时,由于多糖不耐酸碱,因此会使部分多糖分解,也存在着一定的不足。

谢红旗等[12],利用酶法提起香菇多糖,将香菇500g,粉碎,加适量水,加入115%中性蛋白酶在50℃

以及动物体内含量丰富。

20世纪60年代以来,人们逐渐发现多糖具有复

和pH值为418条件下酶解60min,加水至10L,然后升温至95℃,使生物酶失活,

在95℃温度下药物提取器中恒温提取2h,滤布过滤,收集滤液。酶解法可以大大提高多糖的提取效率,并且降低蛋白质含量。但药品价格较贵,温度控制严格,操作成本较高。

现发展出用超声波和微波辅助多糖提取法。李俊等[13],利用超声波辅助提取罗汉果多糖,取干燥、粉碎的罗汉果100g根据实验条件中入50℃热水,超声波提取3次,每次5min,合并各次提取液,减压浓缩;往浓缩液中加入95%乙醇使罗汉果多糖沉淀,高速离心15min得到沉淀,用丙酮洗涤5次,在-50℃下冷冻干燥,得罗汉果粗多糖。经过实验证明,超声波辅助提取多糖明显提高多糖的提取率。

杂多样的生物活性和功能[1～9],如多糖有免疫调节功能可作为广谱免疫促进剂,作为药物可以治疗风湿病,慢性病毒性肝炎,癌症等;还具有抗病毒,抗感染,抗辐射,抗凝血,降血糖,降血脂,消除氧化自由基,促进核酸与蛋白质的生物合成等作用。多糖的分析方法也有很多,且日益受到人们的关注和研究。

　　多糖为大分子化合物,易溶于水,通常采用水提醇沉法[10],但耗时较长,且提取效率不高。为了提高多糖的提取效率,在水提醇沉法的基础上发展了碱提取法[9],酸提取法[11]。此两种方法在大大提高多糖

收稿日期:2007-11-19

基金项目:重庆市自然科学基金(CSTC2007BB5370)

作者简介:刘婷(1984～),女,硕士生;周光明(1964～),男,教授,研究方向:分析化学

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多糖测定方法

刘　婷等　多糖的提取和分析方法　　　　　　　　　　　　　　　　　20081Vol122,No.3　化工时刊微波辅助提取是利用微波能的加热效应来加速溶剂对固体样品中目标化合物的提取的新技术。邓永智等[14]利用微波辅助提取法通过正交实验法从海水小球藻中提取多糖,在70℃,功率为600W,提取时间为30min的条件下海水小球藻中的多糖可以得到较好的提取。超声波和微波辅助提取多糖操作简单,且不会引入杂质,是很好的多糖提取方法。

法。212　多糖的组分分析

多糖组分的分离测定方法目前主要有高效液相色谱法(HPLC),气相色谱法(GC),薄层色谱法(TLC),高效毛细管电泳法(HPCE)等。

杨兴斌等[21]采用1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化反相高效液相色谱法,建立了9种常见单糖的分离模式,并成功地用于当归多糖的单糖组成分析,具有良好的重现性,结果表明,当归多糖由甘露糖,鼠李糖,葡萄糖醛酸,半乳糖醛酸,葡萄糖,半乳糖及阿拉伯糖7种单糖组成,其物质的量比为0157∶1100∶0113∶3106∶8116∶7117∶12169。该方法灵敏快速,准确,方便,可在线大批量分析。

邓永智等[14],在MS参数:VF-5MS毛细管色谱柱(m×0mm,美国);进样口温度280/至210℃,保持,0mL/min;离子化模

211　多糖的含量分析

由于糖类具有还原性,在多糖的定量测定方面可

以根据糖的还原性进行测定,也可将糖转化成为糖醛衍生物进行测定。

经典的多糖测定方法为苯酚-硫酸法[15]和蒽酮-硫酸法[16],均以无水葡萄糖为对照品,分光光度法

测定,计算含量。这两种方法快速、方便、准确,但这两种测定方法对有色样品都不理想,苯酚-样品颜色的影响更大,-]-,结果分别为0185±0101%,1141%±0106%,和2163%±0127%,傅傅强等[18]认为这一结果偏低,主要是以葡萄糖作标准曲线的原因,并提出以校正因子修正测定结果,同时测定了江西獒源的红茶、绿茶和乌龙茶的茶多糖含量,分别为3%～315%、4117%～6135%、3110%～3153%。比较两种计算方法的结果,相差很大,一方面是因品种、加工方法等的差异导致的,另一方面是因为用作计算校正因子的茶多糖为非纯品,使得校正因子偏大而导致的。

最近有学者比较研究了苯酚-硫酸法和间接碘量法[19]测定灵芝多糖,间接碘量法可分别测定样品中总糖和还原糖的含量,消除了样品还原性杂质的干扰,所测结果更接近实际多糖含量。通过改进间接碘量法,使滴定过程不需要在沸腾状态下进行,从而除去了温度条件对滴定结果的干扰,使反应更易控制。间接碘量法具有干扰少准确度高的特点,但与苯酚-硫酸法相比,操作过程较为烦琐。

多糖含量的测定还有3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法,该方法操作简单,快速,灵敏度高,杂质干扰较小。王红英[20]等利用该法测定麦冬多糖含量,精确度高。重现性好。是一种可取的多糖常规测定方

离子化能量70eV;离子阱温度180℃;接口温度280℃;质量扫描范围40～550amu的条件下利用气相色谱-质谱联用法分析了海水小球藻多糖的单糖组成。

颜军等[22]通过斑点分离度,清晰度,有无拖尾现象及展层时间等方面,利用薄层色谱法快速分析了多糖的单糖组成,通过实验确定了适合的展开剂为展开系统(乙酸乙脂∶吡啶∶无水乙醇∶水=8∶2∶1∶2),合适的显色剂为苯胺-二苯胺磷酸显色剂。

耿越等[23]采用高效毛细管电泳法测定玉米花粉多糖中单糖的组成,样品经水解后,经α-萘胺衍生化,电泳条件为:缓冲液为75mmol/L硼砂溶液(pH=915);柱温22℃;电压16kV;检测波长200nm;气压进样,进样时间为5s。测得玉米花粉多糖主要由葡萄糖,阿拉伯糖和半乳糖3种单糖组成。该方法操作简单,精度高,可成为测定多糖中单糖组分的方法。周蓉[24],季宇彬[25]等也利用高校毛细管电泳法成功分析了甘草多糖以及龙葵多糖的单糖组分。

综合各类方法,HPLC有分离速度快,分辨率高,分离效率好,重现性好,不破坏样品的优点。但糖类本身没有紫外吸收,只能采用示差折光监测器(R1)或蒸发光散射检测器(ELSD)检测。RI分辨率低,而ELSD效果虽好却价格昂贵。另外,采用HPLC分析

时,色谱柱的选择比较困难。一般采用氨基柱但分离

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