一个新的产黄青霉谷胱甘肽转移酶基因的克隆和鉴定

以产黄青霉(Penicillium chrysogenumv Thom)cDNA为模板,克隆得到一个新的谷胱甘肽转移酶基因PcgstB,其开放阅读框长651bp,编码216个氨基酸的蛋白质。与已知序列进行BLASTp比较显示,该蛋白具有保守的GST结构域,与烟曲霉GstB的序列一致性最高,达65%。将Pc gstB与原核表达

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一个新的产黄青霉谷胱甘肽转移酶基因的克隆和鉴定

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石家庄<河北师范大学生命科学学院，$Y$$<7

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石家庄!华北制药集团新药研究开发有限责任公司，

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摘要以产黄青霉（A%$#0#,,#)80"*2&(1%$)8=>’4）克隆得到一个新的谷胱甘肽转移酶基因I01&/J，其开放阅读0;*8为模板，

编码!<7个氨基酸的蛋白质。与已知序列进行Ja8G=9比较显示，该蛋白具有保守的]G=结构域，与烟曲霉]?:J框长7Y<59，

的序列一致性最高，达7Yc。将I01&/J与原核表达载体9=60ZZ8连接得到表达质粒9=60O1&/J，转化大肠杆菌;MY，经WI=]诱!导后获得以可溶形式表达的重组I0]?:J蛋白。以<O0>(’6’O!，（K;*J）为底物检测，确认该蛋白具有]G=活性。#O31D1:6’5/DU/D/关键词

谷胱甘肽转移酶，产黄青霉，原核表达，活性测定

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文献标识码

8

文章编号<$$$O"$7<（!$$%）$#O$<7QO$Y

中图分类号

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谷胱甘肽转移酶（C(,:B:>1’D/:6BD?E/6B?/，]G=，TK是一个具有多种生理功能的同功酶家族，!)Y)<)<Q）

存在于植物、动物和微生物等几乎所有的生物种类中，分为胞内可溶性]G=、线粒体]G=和微体]G=

三

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+W8X1BD：=/(：PQ7O"<<OQ7$Y%7#Z；RBS：PQ7O"<<O77%7Y$%；TO4B1(：[1B\1BDU>V>’:4B1()0’4国家科技攻关计划资助项目（*’：!$$!J8%<<!8<7）。

以产黄青霉(Penicillium chrysogenumv Thom)cDNA为模板,克隆得到一个新的谷胱甘肽转移酶基因PcgstB,其开放阅读框长651bp,编码216个氨基酸的蛋白质。与已知序列进行BLASTp比较显示,该蛋白具有保守的GST结构域,与烟曲霉GstB的序列一致性最高,达65%。将Pc gstB与原核表达

张媛等：一个新的产黄青霉谷胱甘肽转移酶基因的克隆和鉴定

C!4

［!］种。"#$可以催化谷胱甘肽（%&’()(*+,-.，上"#/）

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的巯基0#/与生物体内源及外源的亲电子化合物（如：芳烃氧化物、不饱和羰基、有机卤化物等）结合，形成更稳定、更易溶解的化合物，并将其泵出体外以

［1］达到解毒的目的。另外，"#$还参与体内化合物

载体与试剂：原核表达载体D$L>44@为

克隆载体D"MN0$购自FL,;.%)F*);)>+)公司产品，

公司。各种限制性内切酶、$:67@连接酶、$)O酶、随机引物（P)-E,;/.Q);.L?）购自FL,;.%)公E7$F、司，连接试剂盒67@<+%)(+,-R+(A.L1SI购自$)R)P)，67@凝胶回收试剂盒MT0!I?D+->,&’;-反转录67@".&MQ(L)>(+,-5+(购自UVWU@#V8公司，

酶#’D.L#>L+D($N/P7)?./H为V-X+(L,%.-公司产品，!0

（867U）购自#+%;)公司，低8*&,L,01，:0E+-+(L,Y.-Z.-.

运输、细胞信号途径调控等。目前，"#$的研究多集中在哺乳动物、植物、昆虫中，在动物中，"#$可以加强体内有害物质的清除，保护生物体免受侵袭；在植物中，则在解除杀虫剂、除草剂毒性方面有很重要的作用。

可溶性"#$的三级结构多为球状二聚体，亚基分子量介于1231456，每个亚基的多肽链形成两个结构域：70末端为"#/结合位点；80末端为亲电子

物质结合位点，决定其底物的特性。根据它们的底物特异性、对抑制剂的敏感性、免疫学特性和氨基酸序列相似性，哺乳动物中的可"#$被分为许多亚型：溶性"#$可分为9种，、、、、、、、和(；其他还!#$%’"&有植物中特有的)和*型"#$，昆虫中的+和,型，

［2］

。在真菌中"#$的研究相以及细菌中的-型"#$

对还很少，且已经鉴别的真菌"#$与已有的亚型都

［:］

不相同。丝状真菌产黄青霉（!"#$%$&&$’(%)*+,-."#’(

是重要的-——青霉素的工$*,;）0内酰胺类抗生素—业生产菌，具有重要的商业价值。许多研究表明，产黄青霉中"#/的代谢可能与青霉素的合成密切相

关。首先，（.在结"#/0<0%&’();=&0<0>=?(.+-=&0%&=>+-.）构上类似于青霉素生物合成途径中的关键中间体+0（<0（<<600氨基已二酰）0<0半胱 …… 此处隐藏：10129字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……