实验七 染色体核仁组织区的银染色法

染色体核仁组织区的银染色法

核仁组织区(nucleolar organizing regions,NORs)是指参与形成核仁时的染 色体区，核仁从核仁组织区部位产生，同时 与该区紧密相连。核仁组织区定位在核仁染 色体次缢痕部位。对人来说，在13, 14, 15, 21, 22对染色体上存在核仁组织区。

一、实验目的掌握核仁组织者区(NOR)的快速银染显示法，

并了解NOR在细胞中分布情况。

二、实验原理 染色体上为5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA编码的基因 (rDNA)所在的部位，称为核仁组成区(NOR)。在间 期细胞中，这一区域的染色质，参与形成核仁，由于核仁 直至前期结束才完全消散，所以这一部分染色质常常来不 及完全收缩，在中期染色体上，比其它染色质更疏松，因 而被淡染，即表现为次缢痕结构。 每个染色体组中，常有多个NOR。例如人的23对染色体中， 有5对端部着丝点染色体短臂的次缢痕处为NOR。然而， 并不是所有的NOR随时都出于转录之中。当NOR在间期 转录时，产生一种与转录活动有关的酸性蛋白，此蛋白可 保留至中期并能将染液中的银离子还原为金属银而显现为 黑色。所以银染法可在中期染色体上显示具有转录活性的 NOR数目，而且，染色的深黑程度，还可以反应出基因的 活性高低。

三、实验用品1、材料 人或其他动物的染色体制片 2、试剂(所有试剂均应为AR级) (1)50%硝酸银溶液：5g硝酸银溶解在10mL蒸馏水 中，过滤(不过滤亦可),保存在用铝箔包裹的玻 璃容器内，可稳定的保存1年。 ( 2 )明胶显影液：称取 2g 明胶( gelatin )粉末溶解 于 99mL 蒸馏水中，加 1mL 甲醛( formylic acid )。 ( 3 ) 0.067mol/L 磷酸缓冲溶液( pH6.8 )和 Giemsa 原液的配制同“染色体标本制作及其组型实验相 同”。 (4)2% Giemsa磷酸缓冲溶液

实验方法( 1 )在培养皿中底部放一用蒸馏水润湿的滤纸，上 放两根竹签，置水浴内保温至60℃~65℃。 (2)载玻片标本细胞面朝上平放其上，加2滴明胶显 影液和 4 滴 50%硝酸银溶液，覆以盖玻片，直到载 玻片标本呈现金褐色为止，一般为3~4分钟。 ( 3 )移除擦镜纸或盖玻片，并用蒸馏水快速漂洗数 秒，晾干。 (4)显微镜观察，分析。a .被银染色的载玻片标本，根据染色深浅可用 2% Giemsa磷酸缓冲液( pH6.8)复染1min,以便观察和摄影。 b.新鲜制片比片龄长的效果更好。 c.吸50%硝酸银与明胶显影液的吸管最好一样粗细。

实验结果 若染色适中，间期核及染色体为金黄色，油镜观察， 可在某些染色体上看到成对的黑色小点，此即为银染 NOR(Ag- NOR)。 若整张片子色淡，间期核及染色体都不易看清，为染 色时间不足，在未滴

过香柏油的情况下，可重新续染。 若染色时间偏长，则染色体为棕色，此时，仍可看到 黑色的NOR,只是NOR与染色体间的反差较低。染色 严重过度时，整张片子都布满黑色沉淀，这样的标本 一般都丢弃不用。若标本珍贵，也可采用特殊方法褪 色后重新染色。

作业 在油镜下绘制一中期分裂相图，显示 AgNOR的位置、数目和形态。