ECM及Matrigel使用手册

里面有ECM以及Matrigel各种产品的使用方法,常见问题等等,希望对大家有帮助!

BD Bioscience Discovery Labware

TM

BD Biocoat 产品使用指南

BD BiocoatTM MatrigelTM 基质 BD BiocoatTM 细胞相关检测系统

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目 录

1 BD BiocoatTM MatrigelTM 基质

1.1 Matrigel基底膜基质胶.........................................................................................................1 1.2 高浓度HC Matrigel基底膜基质胶......................................................................................3 1.3 人来源细胞外基质................................................................................................................4 1.4 Ⅲ型人重组胶原蛋白............................................................................................................5 1.5 高浓度层粘连蛋白/巢蛋白混合物.......................................................................................6 1.6 人胚胎干细胞专用的Matrigel基质....................................................................................7

2 BD BiocoatTM 细胞检测相关系统

2.1 Biocoat肿瘤侵袭系统...........................................................................................................8 2.2 Biocoat血管生成系统：内皮细胞侵袭.............................................................................10 2.3 Biocoat血管生成系统：内皮细胞迁移.............................................................................12 2.4 Biocoat血管生成系统：内皮血管形成.............................................................................14 2.5 Biocoat HTS Caco-2检测系统............................................................................................15

附录：细胞培养系统快速使用指南.............................................................17

BiocoatTM MatrigelTM常见问题..........................................................17

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1 BD BiocoatTM MatrigelTM 基质

1.1

Matrigel基底膜基质胶

BD产品货号：354230 354234 356230 356231 356234 356235 356237 储存和运输：-20度储存，干冰运输。 操作指南

BD采用专利技术，从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中分离出BD Matrigel 基底膜基质，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等组成，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。BD Matrigel基底膜基质在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。

BD Matrigel 基底膜基质形成的三维培养基质，可促进上皮细胞、肝细胞、Sertoli细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。同时，Matrigel还能影响乳腺上皮细胞的蛋白表达，支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。高浓度的Matrigel适用于研究体内血管生成和肿瘤细胞迁移及肿瘤模型的建立等。 产品特性

Matrigel基质会有色差变化（淡黄色到深红色），是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的，但是与5％CO2平衡后色差即会减少。冻融后，轻轻摇晃试剂瓶使Matrigel分散均匀。所有操作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用70％乙醇擦拭，并自然干燥。应使用预冷的移液器以保证Matrigel呈匀浆状。

细胞可在0.5mm厚度的Matrigel基质层表面生长，也可在1mm厚度的Matrigel三维基质内生长。过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的分化研究。

注意：可将冻融后的Matrigel分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保存，避免多次冻融。

Matrigel在22-35℃温度环境下快速成胶，因此溶解时在4℃冰上过夜冻融（4度时会随着温度的上升部分成胶）。所有用品在使用前需置于冰浴，必须使用预冷的移液管、吸头及小管操作Matrigel。成胶后的Matrigel可以在4℃24－48小时后重新呈液态。

推荐包被与成胶方法

注意：为了保证Matrigel基质膜的成胶性能与稳定性，稀释浓度不应低于1：3，可用无血清培养基稀释，Matrigel成胶后立即使用。 薄胶成胶方法：

1、 冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

2、 将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为50μL/cm2生长面积的Matrigel基质。 3、 在37℃放置30分钟，即可使用。 厚胶成胶方法：

1、 冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

2、 将需要使用的培养板置于冰浴，将培养的细胞与Matrigel基质混合，用移液枪头使其悬浮

于基质中。加入浓度为150－200μL/cm2生长面积的Matrigel基质。

3、 在37℃放置30分钟，可成胶。可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。 薄层包被方法：

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1、 冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

2、 根据使用需要，采用无血清培养基稀释Matrigel基质。根据实验需要确定最佳包被浓度。 3、 将稀释的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。

室温下孵育1小时。

4、 去除未结合的Matrigel，用无血清培养基轻轻地冲洗。

用BD细胞回收剂（354253）或离散酶（354235）可降解Matrigel基质，冰浴7小时后回收得到细胞。

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1.2

高浓度HC Matrigel基底膜基质胶

BD 产品货号：354248 354262

储存和运输：-20度储存，干冰运输。 产品特性

Matrigel基质会有色差变化（淡黄色到深红色），是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的，但是与5％CO2平衡后色差即会减少。冻融后，轻轻摇晃试剂瓶使Matrigel分散均匀。所有操作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用70％乙醇擦拭，并自然干燥。应使用预冷的移液器以保证Matrigel呈匀浆状。

细胞可在0.5mm厚度的Matrigel基质层表面生长，也可在1mm厚度的Matrigel三维基质内生长。过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的分化研究。

注意：可将冻融后的Matrigel分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保存，避免多次冻融。

Matrigel在22-35℃温度环境下快速成胶，因此溶解时在4℃冰上过夜冻融（4度时会随着温度的上升部分成胶）。所有用品在使用前需置于冰浴，必须使用预冷的移液管、吸头及小管操作Matrigel。成胶后的Matrigel可以在4℃24－48小时后重新呈液态。

注射步骤：

1、 注射前，必须保证Matrigel和细胞悬浮液在不冷 …… 此处隐藏：13766字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……