山苍子油的体外清除自由基作用

山苍子油的体外清除自由基作用

程超(湖北民族学院生物科学与技术学院，湖北恩施 445000)程超，讲师,研究生，

主要从事于食品化学与资源开发工作

摘要：本文以新鲜的山苍子为原料，通过超声波辅助水蒸气蒸馏法进行山苍子油的提取，并通过 Fenton 体系和邻苯三酚自氧化法研究了山苍子油在体外对自由基的清除作用。实验结果表明，超声波法可以提高山苍子油的得率，山苍子粗油可以有效清除羟自由基、超氧自由基。 关键词：山苍子油；抗氧化；自由基

中图分类号：TS201.4；文献标识码：A；文章篇号:1007-2764(2005)01-0061-018

The Elimination of Free Radical in Vitro of Litsea Cubeba Oil

Cheng Chao(The Bioscience and Technology College in Hubei Institute for Nationalities, Enshi 445000,China)

Abstract：In this article，using fresh Litsea Cubeba as raw material, the oil of its was extracted by water stream evaporation and ultrasonic wave. At the same time, the elimination effect in vitro of Litsea Cubeba oil was studied. The results showed that the extracting rate of Litsea Cubeba oil was enhanced by ultrasonic，and Litsea Cubeba Oil has a great effect on the elimination of free radical. Keywords：Litsea Cubeba Oil; Antioxidation; Free radical

山苍子油为淡黄色到棕黄色油状液体，柠檬醛是其主要成分占 60%~80%，最高可达 90%，是合成香料及制药工业重要的中间体[1,2]。除此之外，还含有甲基庚烯酮，香茅醛，蒎烯、茨烯、拧烯及松油醇等，是合成紫罗兰酮系列高级香料的主要原料，也是食品工业良好的天然增香剂。

研究表明山苍子油具有较强的抗氧化活性，本文利用 Fenton 反应法产生羟自由基，其容易与甲基紫上的共轭双键结合，从而使其褪色。通过加入山苍子油与甲基紫竞争结合羟自由基，从而间接测定出山苍子油清除羟自由基的能力[3]。此外利用邻苯三酚自氧化法产生超氧阴离子自由基 O2-，其自氧化产物在 420nm 呈现最大吸收峰，在反应体系中加入能清除自由基的物质，使其吸光度低于对照组，反应一段时间后，加入抗坏血酸可终止反应，使吸光度值稳定，便于测定[4]。 1 材料、试剂与仪器 1.1 实验材料

山苍子：购于湖北省恩施市。 1.2 试剂

1mol/L FeSO4溶液：称取 5.567g FeSO4 5H2O 固体，用双蒸水定容至 20ml；1mmol/L 甲基紫溶液;：称取 0.0078g 甲基紫粉末定容至 20ml；30%H2O2溶液；市售30%H2O2用高锰酸钾法标定，浓度为 7.64mol/L。取 1ml H2O2稀释至153ml，从中取1ml 加双蒸水定容至 20ml，即为 2.5mmol/L H2O2溶液；0.2mol/L KF 溶液：称取 0.0376g KF 固体加双蒸水至 2ml；Tris-HCL 配制：称取 1.21g 三羟甲基氨基甲烷，加双蒸水定容至50ml；从中取25ml 与10.95ml0.2mol/L HCL 混合，加双蒸水至 100 ml 即为 0.05mol/LTris-HCL缓冲溶液[5]；45mmol/L 邻苯三酚溶液，用 0.05mol/LTris-HCL溶解(pH=8.2)；5%抗坏血酸溶液；蔗糖脂肪酸酯：HLB 值 13。 1.3 仪器

UV755B 紫外可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；水蒸汽蒸馏装置：JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎机，宁波新芝科器研究所。

2 实验方法

2.1 水蒸汽蒸馏法提取山苍子粗油工艺流程

鲜果→样品瓶→一次蒸馏提取→二次蒸馏提取→分离→装瓶、密封、冷藏 鲜果→研碎→超声波粉碎→一次蒸馏提取→二次蒸馏提取→分离→装瓶、密封、冷藏 2.2 实验操作

在用水蒸汽蒸馏法提取山苍子油时，对原料进行粉碎。称取鲜果研碎，将碎末放入锥形瓶中，加水至刻度，锥形瓶放入装有冰块的大烧杯中，超声波粉碎，取出锥形瓶将料液倒入 500ml 磨口圆底烧瓶中，连接好水蒸汽蒸馏装置。在圆底烧瓶中加入少量沸珠，蒸馏至烧瓶中剩少许水时，加 100ml 蒸馏水进行二次蒸馏。提取的油水混合物用分液漏斗分离，将粗油装入10ml 容量瓶中，密封、冷藏。

未经超声波处理的鲜果也采用上法提取。 2.3 山苍子粗油得率计算

山苍子粗油得率(%)=(m2-m1)/m ×100%

式中：m1—100ml 容量瓶重(g)；m2—粗油与容量瓶质量(g)；m—取样鲜果质量(g)。

2.4 甲基紫溶液的制备

取 3 份 150ml 蒸馏水分别加入 1.5ml 甲基紫溶液，用 1mol/LH2SO4溶液调 pH 为 3.5 后，将其均分成 9 份装至 100ml 锥形瓶中。 2.5 羟自由基·OH 的产生

取二份甲基紫溶液，一份边搅拌边加入 1mlH2O2和 0.2mlFeSO4溶液，反应 10min 后，加入 1 滴 KF 溶液以消除 Fe3+的干扰，以水为参比，于 580nm

处测吸光度值，记为 A1；另一份不加 Fenton 试剂，测吸光度值记为 A0，ΔA=A0–A1。用 ΔA 间接表示·OH 的生成量，ΔA 越大，·OH 的生成量越多。 2.6 羟自由基·OH 清除率的测定

取0.1ml 粗油加入到10ml含0.1%蔗糖脂肪酸酯的乳化液中。取 5 份甲基紫溶液，分别加不同体积粗油乳化液，于 580nm 处测吸光度值，记为 A2。

·OH 清除率=(A2- A1)/(A0-A1)Χ100%

2.7 超氧自由基清除率的测定

在一系列试管中加 5ml 0.05 mol/L 的 Tris-HCL 缓冲液，对照组分别加不同体积的粗油乳化液，混均在420nm 处测定吸光度，记为 A0，实验组Ⅰ分别加不同体积的乳化液并混匀，再加入 100μl 抗坏血酸溶液，待计时至5min 时，立即注入反应体系中，混匀以终止反应在 420nm 处测定吸光度，记为 A1。实验组Ⅱ不加乳化液，按上述方法终止反应后，再加入对应的不同体积粗提液并混匀，在 420nm 处测定吸光度，记为A2[5]。

抑制率(Y )=(A2- A1)/(A2- A0)Χ100%

3 结果与分析 3.1 山苍子粗油的提取

山苍子油是一种极易挥发的香精油，通过水蒸汽可使山苍子油从其鲜果中浸提出来。该法提取时间较长，粉碎后沸腾历害，要注意控制加热温度。 表 1 超声波处理对山苍子得率的影响

Tab1 Influence of ultrasonic wave on the extraction rate of oil 超声波处理 未处理 得率(%)

1.180

5min 1.355

10min 1.405

15min 1.407

20min 1.408

由表 1 可知超声波处理鲜果后，山苍子油得率有所提高，粉碎 10min 后，

粗油得率基本保持稳定。本实验所用山苍子鲜果较嫩，工艺复杂，提取粗油有部分损失。故得油率与有关资料提供的数据相比微偏低。 3.2 初始反应 pH 值的确定

pH 对 Fenton 体系的进行影响很大，因为过低的pH 会导致 Fe(OH)3沉淀的生成，同时对甲基紫的吸光度值的稳定性也有很大的影响，所以在此对初始 pH进行了确定。

实验研究发现，在 pH=3.5 时最利于 Fenton 反应的进行，甲基紫的颜色与 pH 关系如下：pH1.0→1.5：绿→蓝；pH2.0→3.0：蓝→紫；pH≥3.0 的酸性溶液中呈紫色，于 580nm 处有最大吸光度值，所以初始 pH确定为 pH3.5。 3.3 甲基紫浓度的确定

甲基紫的浓度不同，在 580nm 处的吸光度值也不同，从而导致精确度下降，为了增加实验的准确性，在此对甲基紫的浓度进行了确定，具体见表 2。 表2 不同浓度甲基紫溶液的吸光度

Tab 2 The absorbance with different concentration of Methyl Violet 浓度(mmol/L) 0.0067 吸光度

0.399

0.01 0.585

0.0133 0.827

0.02 0.983

从表 2 可以看出，甲基紫浓度在 0.01mmol/L 时，吸光度值近 0.7，此时测定精密度较高。

3.4 山苍子油对·OH 的清除作用…… 此处隐藏：3464字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……