植物组织培养实习报告

篇一：植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告

一、实验目的

1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；

2．通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织 学习愈伤组织的建立方法；

4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织 学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。

二、实验原理 （一）植物组织培养

植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。 （二）植物细胞的全能性

植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。 （三）组织的分化与器官建成

外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。

（四）培养基的组成

培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。

三、实验器材

高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室 镊子、记号笔、橡皮筋、玻

璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。

四、实验材料

豌豆种子

五、实验药品

药品 、70% 酒精、 0.1% 升汞、MS培养基、蒸馏水、NaOH、 84消毒液、蔗糖、琼脂等。

六、实验步骤

（一）培养基母液的配制

表1.MS培养基个成分的含量（单位：mg/L）

表2.MS培养基所需母液以及扩大倍数

名称 大量元素 微量元素 Ca盐 Mg盐 Fe盐 有机 肌醇 激素

扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100

定容体积(ml)

500 500 500 500 500 200 200 50

吸取毫升数/L

20 20 20 20 20 10 10 5

（注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积）

表3.配制母液所需的药品及称取量

（注：根据表1与表2计算各物质的称取量）

药品名称 NH4NO3 KNO3 KH2PO4

称取量（mg）

41250 47500 4250

药品名称 KI

Na2MnO4?2H2O CuSO4?5H2O

称取量（mg）

20.75 6.25 0.625

CaCl2?2H2O 11000 CoCl2?6H2O 0.625 MgSO4?7H2O 9250 肌醇 2000 FeSO4?4H2O 695 甘氨酸 40 Na-EDTA 932.5 盐酸硫胺素 8 MnSO4?7H2O 557.5 盐酸吡哆醇 10 ZnSO4?7H2O 215 烟酸 10 H3BO3 155

（1） MS大量元素母液的配制 参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。

名称

重量（mg）

名称

重量(mg)

NH4NO3 KNO3

41250 47500

KH2PO4 CaCl2·2H2O

4250 11000

（2） MS微量元素母液 参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。

名称 KI H3BO3 MnSO4·7H2O ZnSO4·7H2O

重量(mg) 20.75 155 557.5 215

名称 Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O

重量(mg) 6.25 0.625 0.625

（3） MS有机母液 参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至200ML存放于冰箱中备用。

名称 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇

重量(mg)

名称 盐酸硫胺素 甘氨酸

重量(mg)

2000 10 10

8 40

（4） MS铁盐母液的配制 参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。

名称 EDTA二钠

重量(mg)

932.5

名称 FeSO4·4H2O

重量(mg)

695

（5） MS钙盐母液的配制

参考表3称取11000mg的CaCl2?2H2O用蒸馏水溶解定容至500ML，保存于冰箱备用。

（6） MS镁盐母液的配制 参考表3称取9250mg的MgSO4?7H2O用蒸馏水溶解定容至500ML，保存于冰箱备用。

（7） MS肌醇母液的配制 参考表3称取2000mg的肌醇用蒸馏水溶解定容至200ML，保存于冰箱备用。

（8） MS激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。

（二）培养基的配制

以配制1L的MS培养基为例进行如下操作：

（1） 取1L的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾；

（2） 分别取（一）中配制的8种母液放入小烧杯中，然后加入，边加边搅拌；

（3） 称取30g蔗糖加入，边加边搅拌；

（4） 称取8g琼脂加入，边加边搅拌，知之琼脂粉溶解； （5） 定容至1L，加入激素母液，用NaOH调PH6.0左右；

（6） 将培养基分别分装于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮纸用绳子扎紧；

（7） 放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右；

（8） 灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。

（三）高压蒸汽灭菌锅的使用方法

具体操作步骤：

（1） 高压锅放水至平把架；

（2） 把包扎好的培养基装入高压锅；

（3） 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀； （4） 然后接通电源；

（5） 压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)；

（6） 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针下降至0.11MPa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟； …… 此处隐藏：1078字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……