金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测

[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺激动物产生抗体。以自制SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,其最高效价为1∶100 000。SEB浓度在1-1 000 ng/ml范围内,竞争抑制率与SEB浓度的对数值呈显

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安徽农业科学，orao A h i s .c.08 3 ( )2 1 Ju l f nu A a Si20,6 7:67—2 1 n 69

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陈玉敏

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马君叶

金黄色葡萄球菌 B型肠毒素的酶联免疫检测段鸿斌 (西农科大食科与程院陕杨 1o2阳业等科校物术，南阳 60, 1北林技学品学工学，西凌71;信农高专学生技系河信 40) 2 . 20. 4o摘要[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[法] B L/方以 A B e小白鼠为免疫对象，自制的高纯度金黄色葡萄球菌 B型肠毒素以 (E ) s B为免疫抗原，究其抗体的产生过程和效价，建立 S B的间接竞争 E I研并 E L A检测方法。[ S结果]自制 S B纯度较高， E能较好地刺激动物产生抗体。以自 S B为免疫抗原注射 B L/小白鼠，制 E ABe其最高效价为 110 0。S B浓度在 1 0#m范围内，: 0 E 00~1 0n l 0竞争抑制率与 s B浓度的对数值呈显著线性关系。当 S B的浓度为 5 50n/ l, E E~ 0 m时随样品中 s B g E浓度的增加，污染样品的回收率变异系数减小， 检测准确度提高。[结论]对不同污染程度的牛奶样品，用间接竞争 E I利 LS A法检测其 S B留的灵敏度远远高于生化法。 E残 关键词牛奶；金黄色葡萄球菌 B型肠毒素；原；抗抗体；LS EI A中图分类号 Q 3 . 文献标识码 A 99 9 9 文章编号 0 1. 6 1(o8 o— 2 1— 3 57 6 12o ) 06 7 0 一 7En y eLik d I z m n e mmu o o b n s y frS a hyo oc lEne oo i i￣珂k n s r e tAsa o tp lc c a tr txn B n

DU^ Ho gbn ( ol eo odS i e n nier g ot et F U ie i,y l,Sani 1 10 N n -i C lg f o ce eadE g en,N r w s A& nvr t￣gi e F n n i h sy g n h ax 720 ) Abtat I bet e ersac i dt poieterta ai o tedt tno beei t i .I to t A B/ ht iea i src O jci eer a vJ h me o rv hoei l

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Bcnn n a pe C c i Frm l smp髑 il f rn l i er}t e f s o u oJ k}di p uo e 1 s sii f t i E e d e y ee t y d cn su ig te idi c mp tie E S m to a ral ih rta a fbo h m e to sn n r tc h e o eiv U A hd w getyhg e n t to ic e a m h d. t e s h h i le Ke wo d M;S p yo oc trtxn B;A tgn;A t oy;EIsA y rs a t h lc ca Eneoo i l n ie n i d b I

金黄色葡萄球菌肠毒素 ( t hl oclE t oi B S py cca n mt n, a o e x S B易于在含有丰富蛋白质和水分、 E)同时含有一定量淀粉的食品中生长 L, 1而牛奶和大多数乳制品符合上述条件，以 J所金黄色葡萄球菌易在乳中快速繁殖并产生大量肠毒素。葡萄球菌肠毒素有极强的耐热性，耐受 10℃达 3 i[。可 0 0m n J 这就造成原料乳经过热处理后，然金黄色葡萄球菌已被杀虽灭，但其产生的肠毒素仍有致病活力的现象。因此，检测乳

北京军事医学科学院五所提供。其他试剂均为分析纯。

112试验动物。B L/雄性小白鼠， .. A Bc健康，周龄，左 4 2g 0右，自湖北省实验动物研究中心。购.

1 13培养基。种子培养基为 L .. B培养基；酵培养基 (发改进的 Y T培养基 )方为 0 8配 .%蛋白胨、 .%酵母提取物、 04 02 .%葡萄糖、 .%氯化钠。R MI 4 02 P 1 0培养基由 G B O公司 6 IC提供。1 2方法 .

及乳制品中金黄色葡萄球菌肠毒素对消费者的健康具有十分重要的意义。

1 2 1金黄色葡萄球菌 B型肠毒素制备及纯化 _ .. 6。 6 l 12 1 1菌液培养。从 L .. . B琼脂板上挑取 S hl ocsa. t y ccd u p a o B .单菌落，种至 1 l B培养液中，7℃培养 1 P1接 0m L 3 2h(5 mn,到种子液。取种子液 1m接种至装有 20m 20r i)得/ l 0 l

金黄色葡萄球菌肠毒素的检测最早采用动物学试验的方法，但是由于试验动

物来源困难、敏度低、灵检测结果不够理想等原因使其应用受到极大的限制|。近年来， 3 J随着食品安全快速检测技术的发展，免疫学检测方法正越来越受到人们的重视 _。笔者以自制的高纯度 B型肠毒素为免疫抗 4 J原，A B C小白鼠为免疫对象， BL/对抗体的产生进程和效价进行分析，并在此基础上建立了金黄色葡萄球菌 B型肠毒素的间接竞争 E IA检测方法， LS旨在为细菌毒素的检测提供理论依据及技术支撑。1材料与方法 11材料 .

发酵培养基的 1 0 l 0m摇瓶中，7℃培养 2 (5 m n。 0 3 0h 20/ i) r 12 1 2发酵液预处理与毒素粗提。将培养 2 的菌液 .. . 0h后于 4℃离心 8mn 1 0 mn,上清液经 04 i(000r i)取/ .5舯滤膜过滤， 30m超滤杯中，截留孔径为 1置 0 l用 0k的超滤膜在 0 2 . Ma P氮气压力下浓缩至原体积的 11 o将浓缩超滤液置于/0冰浴中，根据体积分次磁力搅拌加入固体 ( H )S n饱和 N 1 4 O至度 6%。冰浴 4h后， 0 4o心 1 i(200rm n,上清 C离 5m n 1 0 i)取/

液置于冰浴中继续加入 ( H )S 4至饱和度 8%, N 4 2O 5 4℃过夜， 充分沉淀蛋白，心，上清液，入离心前体积 1 1离弃加/0的水重新溶解蛋白，置于截留分子量 1并 0 k的透析袋中，置于 4 ℃下用 5m o L嘣s溶液 (H值 8 0透析 2。 ml/ p .) 4h

11 1仪器与试剂。u .6F分光光度计， .. v 25 W日本岛津； F ZQ一

8A型酶联免疫检测仪， 5国营华中电子管厂；台式高速离

心机 (G .6 )北京医用离心机厂。4 L 1G, r 0孔酶标板，江玉环浙

医疗器械厂；黄色葡萄球菌 ( t hlo u ar￣ P1由金 S py c s l l)B -, a o c l c e信阳农业高等专科学校实验室保存；牛血清白蛋白(S )华 BA,美公司提供；氏完全和非完全佐剂，i a司提供；介弗 Sm公 g卡苗，亚法生物工程公司提供；抗小鼠 I: R …… 此处隐藏：3160字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……