荧光原位杂交技术

荧光原位杂交技术

植物学报（//）：%###，;<//#/Z//#$

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############################################################### 综述!"#$"%

荧光原位杂交技术的发展与应用

王玲宁顺斌宋运淳吕应堂!

（武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室，武汉!"##$%）

关键词：荧光原位杂交；多色荧光原位杂交；&’(纤维；分辨率；灵敏度；特异性；物理作图；)’(表达图谱中图分类号：*+!,""

文献标识码：(

文章编号：#-$$,$!+.（%###）//,//#/,#$

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9P@4K)’(ASPJAEE3F4P@BBAJ4EFG34K3T3K9@OCAOOEU?8AJA@JAGF9JQ@34CJ3BAJ3F4EGFJAT@O9@B345B83EBAC8,43D9A，34CO9K345KABACB3F4EA4E3B3T3BH，JAEFO9B3F4，C@P@C3BH@4KEPAC3G3C3BHU?83EJAT3ANGFC9EAEF4@49QIAJFG@KT@4CAEQ@KAFTAJB8AO@EBHA@JE34B8AGO9FJAECA4CA,-.,)18HIJ3K3L@B3F4（V67M）U?8AEA@KT@4CAEC@4IA

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CFQI34@BFJ3@OV67M，J@B3FO@IAOO345V67M，Q9OB3CFOFJC8JFQFEFQAP@34B345@4KCFQP@J@B3TA5A4FQ3C8HIJ3K3L@,

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)’(ASPJAEE3F4P@BBAJ4原位杂交（,-.,)18HIJ3K3L@B3F4，67M）是一项利用标记的&’(或)’(探针直接在染色体、细胞或组织水平定位特定靶核酸序列的分子细胞遗传学技

［/Z"］术，为宏观的细胞学与微观的分子生物学研究

因位置与功能之间的相互关系，探讨基因在染色体

［[］

上的分布规律。

衡量67M的几个重要参数有分辨率、灵敏度、容量及杂交特异性。%#世纪[#年代末出现的利用荧光素进行标记或检测的67M即V67M（GO9FJAECA4CA

，使67M灵敏度显著提高，并为利用不同荧光素67M）

来同时定位多个靶序列提供了依据。此外，V67M实验过程比酶联显色检测系统如&(:检测简单得多，信号与载体的颜色对比鲜明，从而逐渐代替酶联显

［%，.］色检测而迅速发展起来。而%#世纪+#年代出现的&’(G3IAJ,V67M，除了显著提高V67M的空间分［/，+］辨率外，也使V67M灵敏度进一步提高。67M在方法上逐步形成了从单色向多色、从中期染色体

架起了一座桥梁，形成一门新的交叉学科———分子细胞遗传学（QFOAC9O@JCHBF5A4AB3CE）。该技术广泛应

用于构建&’(物理图谱（染色体原位杂交

［!］

（=67M））；转基因的细胞学鉴定；检测外源染色体［-］片段和探讨其渗入特点；研究基因组的结构、变异

以及空间分布规律，研究物种间的亲缘关系（基因组原位杂交（167M））和)’(的表达（)’(,67M）。在构建染色体物理图谱方面，67M具有其他方法无可替代的优点，它能把探针直观地定位到具体染色体臂上，能检测出相应探针在基因组中不具任何表型的

［.，$］同源序列；能印证基因的遗传图谱，可以比较物［!］理图谱与遗传图谱之间的差别；同时还可了解基

V67M向粗线期染色体V67M再向G3IAJ,V67M的发展

趋势，灵敏度和分辨率正在由QI向RI、百分距离向碱基对、多拷贝向单拷贝、大片段向小片段再向:(=

收稿日期：/+++,#+,/!接受日期：/+++,/%,/"

基金项目：国家自然科学基金（"+-$#"+!，"+[$#!%"，"++###["，"+$[##/-）；国家科委攀登计划；国家教委博士点基金（%#$+[#//%）。VF94K@B3F4

（"+-$#"+!，"+[$#!%"，"++###["，"+$[##/-）；B8A’@B3F4@O=O3QI345YJF5J@QFG?AC84FOF5HW343EBJH3BAQE：?8A’@B3F4@O’@B9J@O7C3A4CAVF94K@B3F4FG=834@

FG=834@；B8A&FCBFJ@BA\AEB345YF34BVF94K@B3F4FGB8AXK9C@B3F4@OW343EBJHFG=834@（%#$+[#//%）U

（#%$）[$.[%./+U!通讯作者。(9B8FJGFJCFJJAEPF4KA4CAU?AO：

荧光原位杂交技术

33B?植物学报!"#$%&#$’("$)(’("$

［3H，3I］

字图像分析系统。

D?卷

（!"#$%&’"("&$’)’#’"(#*&+,+-+,%）（2%"-$"&$’)’#’"(./01

［3，4］

等方向深入。#*&+,+-+,%）

高分辨率的显微装置和专业化图像分析系统对

［3，［?3］34，?B］

。7J%’#*%&等对相应,5678是至关重要的

的显微装置和图像分析系统加以改进后，利用多色

（"#$%&）!多色荧光原位杂交

5678一个最大的特点是可利用不同颜色的荧

光素标记不同的探针，同时对一张制片进行杂交，从而对不同的靶9:0同时进行定位和分析，并能对不

［;］同探针在染色体上的位置进行排序。即,5678。染色体涂色技术已成功地对人类整个基因组包括

［3<，??］

。??条常染色体和?条性染色体进行了鉴别

［3;］

发明的光谱核型分析（-J%#$&"(K"&2+$2JL7#*&+#K等

能检测血液型疾病的隐蔽型染色体缺失，’@M，7N/）

但是，由于不同荧光素之间的光谱重叠，一般只限于

同时用<种不同颜色进行标记。为了满足分子细胞遗传学特别是人类基因组计划（8=>）日益发展的需要，需要进一步扩大5678的容量。

!’!组合标记#$%&（()"*+,-.)/+-0#$%&）

、比例标记#$%&（/-.+)10-*200+,3#$%&）、多色染色体涂色"40.+()0)/(5/)")6)"27-+,.+,3）

利用组合标记技术，即一个探针同时利用几种不同颜色的半抗原或荧光素进行标记，,5678的容量大大增加。组合标记原则上可标记的探针数为

?@A（3@为半抗原或荧光素的个数）

［3B］

。若用不同比例的各种荧光素对每个探针进行标记，组合标记

5678的容量将更进一步增加，

并能进行定量分析［33］。当应用于这一目的时，组合标记5678便称为“比例标记5678”。多色染色体涂色是利用组合标记5678或比例标记5678对染色体、染色体臂或染色体带特异性涂色探针进行标记而进行的

,5678

［3?，3<］

。将来人们或许能找到大 …… 此处隐藏：15878字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……